oHSV2溶瘤病毒联合氯丙嗪抑制恶性胶质瘤的应用研究

发布时间：2020-11-08 12:43

　　 前言:恶性肿瘤是一类严重危害人类健康的疾病。尽管随着恶性肿瘤发病机制的逐步阐明,越来越多的治疗手段和治疗靶点被应用到临床,但是恶性肿瘤总的治疗效果还是差强人意,5年总生存率不足20%。而且存在单一用药效果差,疗效不持久,单一分子靶向治疗存在脱靶效应等缺点,临床上亟需开发新的治疗方法,尤其是联合用药的治疗方案。溶瘤病毒(OVs)于上个世纪中期首次被报道,是一类自然存在的或人工编辑的病毒,对肿瘤细胞能特异性杀伤。我校特聘教授刘滨磊自主研发的溶瘤病毒oHSV2就是这样一种OVs。临床前研究表明,oHSV2能特异性地杀灭几乎所有肿瘤细胞,有望成为一种广谱抗癌药物,但是对于其联合用药方案目前研究较少。氯丙嗪是第一代吩噻嗪类抗精神病药物,是一种多巴胺受体阻断剂。本课题旨在探讨II型单纯疱疹溶瘤病毒oHSV2联合多巴胺受体阻滞剂氯丙嗪作用恶性胶质瘤细胞U251的体外协同效应,并探讨其可能的作用机制,为联合应用这两种药物治疗恶性胶质瘤提供前期实验依据。目的:研究oHSV2联合氯丙嗪对恶性胶质瘤细胞株U251恶性生物学行为的抑制作用。方法:1、采用MTT法测定oHSV2、氯丙嗪单独应用及二者联合应用时对恶性胶质瘤细胞株U251增殖能力的抑制作用。2、平板克隆形成实验检测oHSV2、氯丙嗪单独应用及二者联合应用时对恶性胶质瘤细胞株U251离体克隆形成能力的影响。3、Transwell小室实验检测oHSV2、氯丙嗪单独应用及二者联合应用时对恶性胶质瘤细胞株U251侵袭、迁移能力的影响。4、依据Chou-Talalay中效原理,以联合给药分析软件CalcuSyn 2.1计算协同作用指数(CI)值,评价联合作用效果。结果:1、MTT实验结果显示oHSV2、氯丙嗪单药对恶性胶质瘤细胞株U251的抑制作用具有浓度依赖性。二者联合作用72 h后,增殖抑制率明显升高,抑制作用显著增强。应用CalcuSyn 2.1软件分析协同效果,二者在很大范围内具有协同增强作用。2、平板克隆形成实验显示oHSV2、氯丙嗪单药都能降低恶性胶质瘤细胞株U251的离体克隆形成能力,而联合用药显著降低恶性胶质瘤细胞株U251的离体克隆形成能力,两者有协同增强作用。3、Transwell小室迁移和侵袭实验显示oHSV2、氯丙嗪单药都能降低恶性胶质瘤细胞株U251的侵袭和迁移能力,而联合用药显著降低恶性胶质瘤细胞株U251的侵袭和迁移能力,两者有协同增强作用。结论:oHSV2和氯丙嗪联合给药对恶性胶质瘤细胞株U251的恶性生物学行为有协同抑制作用。
【学位单位】：湖北科技学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R96
【部分图文】：

p53 蛋白表达水平[26,27]，研究发现吩噻嗪类抗蛋白激酶 1(PDKl)活性，从而导致蛋白激酶 Akt 的激酶的活性而抑制人卵巢癌细胞的细胞酰肌醇 3-激酶(P13K)，表皮生长因子受体(EG2)的活化。更重要的是有研究发现氯丙嗪等抗母细胞瘤、乳腺癌和非小细胞肺癌等肿瘤细胞毒效应，而对正常细胞无细胞毒效应[25,30]提供了有力证据。

oHSV2 CPZ oHSV2+CPZc (MOI) fac (μM) fa C(MOI+μΜ) fa CI0.01 0.151 5 0.152 0.01+5 0.424 1.2750.1 0.431 10 0.334 0.1+10 0.682 1.0131 0.579 20 0.459 1+20 0.904 0.97510 0.663 40 0.548 10+40 0.98 0.410100 0.75 80 0.89 100+80 0.991 0.710

图 3-2 oHSV2 与氯丙嗪联合用药对恶性胶质瘤细胞 U251 的协同效应Fig.3-2 The synergistic effects of oHSV2 and chlorpromazine onU251 cells3.2 平板克隆形成实验结果平板集落形成试验（PCF），在非常低的细胞密度的情况下，单个细胞接种后单个细胞附着于上述平板上得以生存，以形成克隆细胞集落，最后检测根据该细的增殖能力和数量以及集落形成的大小。在正常情况下，仅肿瘤细胞可增殖形成隆，但是最终形成的克隆细胞必须是贴壁细胞和增殖细胞。克隆形成实验已经主体现在许多文献[55-56]中，体现了个体细胞的生存能力和增殖能力两个重要特征。该本实验操作方便。总之克隆形成实验是研究肿瘤细胞增殖能力的重要研究方法常常被应用于药物筛查。通过细胞克隆形成实验，如(Fig.3-3)所示，经 oHSV2 和氯丙嗪处理过的 U251它的克隆形成的数量与未经 oHSV2 和氯丙嗪处理 U251 的对照组相比要低的多，
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本文编号：2874800