淫羊藿总黄酮联合吡柔比星抗人骨肉瘤MG-63细胞的作用机制

发布时间：2020-11-10 13:14

　　 目的:探讨淫羊藿总黄酮(EF)与吡柔比星(THP)联用体外抗人骨肉瘤MG-63细胞的作用机制。方法:设立空白对照组和EF组(EF浓度:50、100、200、400、800μg·m L-1)、THP组(THP浓度:1、2、4、8、16μg·m L-1)及两药联合组(EF+THP浓度:50+1、100+2、200+4、400+8、800+16μg·m L-1)三个实验组,利用倒置相差显微镜观察不同时间段各组细胞形态;作用48小时后,采用CCK-8法检测各组不同浓度的细胞抑制率,根据中效原理计算两药联用的联合指数(CI),分析其相互作用;采用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;RT-PCR及Western-blotting检测Caspase-3、P21、Bcl-2 m RNA及其蛋白的表达。结果:实验组细胞呈不同程度凋亡状态,细胞增殖抑制率随药物浓度增加呈递增趋势,联合组细胞增殖抑制率及凋亡率均明显高于两单药组(P0.05),联合组抑制率在10~90%时CI值处于0.374~0.770之间;EF和THP均能使Caspase-3、P21 m RNA及蛋白的表达明显下降,使Bcl-2 m RNA及蛋白的表达上升(P0.05),联合组趋势更明显(P0.05)。结论:EF和THP明显抑制骨肉瘤MG-63细胞活性,并且通过上调二者Caspase-3、P21 m RNA及其蛋白、下调Bcl-2 m RNA及其蛋白的表达诱导细胞凋亡,两药联合后,细胞抑制率在10~90%时均表现为:EF与THP在体外抗骨肉瘤MG-63细胞具有相互协同作用。
【学位单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R96
【部分图文】：

第 3 章 结果第 3 章 结果3.1 细胞形态学观察骨肉瘤 MG-63 细胞加药 24 小时后细胞增殖开始受抑制：EF 组细胞逐渐变得不规则继而变小变圆，细胞间连接开始消失，细胞周围折光度开始增高，细胞呈现凋亡改变；THP 组细胞在增殖受抑制的同时反而逐渐增大并伸出伪足，最后逐渐变小变圆，细胞质密度开始增高，胞膜逐渐将细胞残骸包裹形成凋亡小体；联合组细胞增殖受抑制程度更明显，细胞变化呈现 EF 和 THP 药物所致两种形态。药物对细胞的抑制及凋亡作用呈现明显的时间和浓度依赖性：随着时间的延长和药物浓度的增加，细胞抑制及凋亡现象越明显。见图 3.1。

图 3.2 EF 和 THP 作用 MG-63 细胞 48h 后细胞凋亡率（x±s，n=3）注：与对照组相比，*P<0.05；与联合组相比，#P<0.05。3.5 Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA 的表达EF 和 THP 分别单独作用 MG-63 细胞 48 小时后，相对于对照组，EF 组、THP 组、联合组的 Caspase-3、P21 mRNA 表达均明显上调，Bcl-2 mRNA 表达明显下调（P<0.05）；而 EF 组与 THP 组相比，Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA的表达无明显区别（P>0.05）；相对于 EF 组或者 THP 组，联合组的 Caspase-3P21 mRNA 的上调趋势及 Bcl-2 mRNA 的下调趋势更明显（P<0.05）。如图 3.所示。

图 3.2 EF 和 THP 作用 MG-63 细胞 48h 后细胞凋亡率（x±s，n=3）注：与对照组相比，*P<0.05；与联合组相比，#P<0.05。3.5 Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA 的表达EF 和 THP 分别单独作用 MG-63 细胞 48 小时后，相对于对照组，EF 组、THP 组、联合组的 Caspase-3、P21 mRNA 表达均明显上调，Bcl-2 mRNA 表达明显下调（P<0.05）；而 EF 组与 THP 组相比，Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA的表达无明显区别（P>0.05）；相对于 EF 组或者 THP 组，联合组的 Caspase-3、P21 mRNA 的上调趋势及 Bcl-2 mRNA 的下调趋势更明显（P<0.05）。如图 3.3所示。
【参考文献】

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本文编号：2877969