一种利用温度控制无外源性添加剂的制备富血小板血浆方法

发布时间：2020-11-20 20:16

　　 富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)是含有数倍于正常人血小板浓度的自体血浆,当它被激活后,可释放出高浓度的多种生长因子。这些生长因子在促进细胞募集、增殖和分化,生成细胞外基质、胶原蛋白和新血管,促进毛囊发育及延长毛发生长期等多个方面中起着重要作用。由于PRP中富含的生长因子具有上述诸多的作用,已在整形外科、创伤骨科、关节骨科、口腔科、皮肤科、烧伤科等科室的临床治疗中得到了广泛的应用。传统的PRP制备方法没有标准的规范,但用不同的方法和装置制备PRP都有类似的步骤。即首先将添加抗凝剂避免血液凝固,通过第一步低速离心去除红细胞和白细胞,然后通过第二步高速离心去除适量的乏血小板血浆,最后添加促凝剂激活血小板,获得高浓度的各种生长因子。然而,抗凝剂及促凝剂这些外源性添加剂的使用可能会带来一些对于PRP使用的安全性和有效性的担忧。我们提出了一种不需要外源添加抗凝剂和促凝剂、单纯通过温度控制来制备 PRP 的方法———-温控 PRP(Temperature-controlled PRP,t-PRP),即保持在4 低温条件下用两步离心法富集血小板,再通过复温至37 ℃使血小板激活,获得高浓度的生长因子。以传统方法制作的PRP(Conventional PRP,c-PRP)为对照,t-PRP在离心富集血小板的过程中,分层更清晰,更有利于去除红细胞和白细胞,且pH值更接近于生理条件(pH = 7.46一7.48),且其血小板浓度是全血的6.58±0.45倍,明显高于 c-PRP(4.06 ± 0.55 倍)。组织学观察发现,t-PRP通过37℃复温相对更缓慢地激活后,其中形成了分布均匀的、可网罗住更多的血小板的纤维蛋白网络,并可能在形成纤维蛋白丝的过程中把生长因子结合在其中。对激活后的t-PRP凝胶本身及其析出的生长因子含量的检测表明,t-PRP凝胶中包含了更多的生长因子,还表现出缓慢释放生长因子的特性。此外,t-PRP还具有与c-PRP 一致的功能,其可以促进创面愈合,且在此过程中不需要额外添加激活剂,在接触组织中的胶原蛋白后t-PRP可逐渐自发激活,凝固成胶并覆盖创面。说明其对于临床使用除了有较好的安全性及有效性以外,还能以液态涂抹、液态注射、固态覆盖等更多样的形式被利用。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R644;R943
【部分图文】：

分别加入２支置于常温的１５?ｍｌ离心管中，每管各１１?ｍｌ，用于制备ｃ－ＰＲＰ。??１．２．?２．２?ｔ－ＰＲＰ与ｃ－ＰＲＰ的制备与激活??温控ＰＲＰ?（ｔ－ＰＲＰ）的制备（图１－１）。抽取的新鲜静脉血每１０?ｍｌ加入１??支预冷的１５ｍｌ离心管中，放入己预冷至４?°Ｃ的离心机中，配平后，用１８０??Ｘ?ｇ的离心力进行低速离心１０分钟。第一次离心后，可见血液分为上层黄色??稍浑浊的血浆层、中间薄层的白膜层及下层的红细胞共３层。把离心管置于试??管冷却盒中，使用移液枪及已预冷的枪头，将位于上层的黄色血浆转移至置于??试管冷却盒中己预冷的新１５ｍｌ离心管中，再放入己预冷至４?°Ｃ的离心机中，??１６??

?浆之间分界面较清晰，白膜层较薄，而ｃ－ＰＲＰ的各层之间边界则相对稍模糊，??在上层黄色的血浆中可见有少量红细胞混杂其中（图１－２）。经过第二次高速??离心后，可见ｃ－ＰＲＰ组中与血小板一起沉积于底部的红细胞多于ｔ－ＰＲＰ组。??ａ?■?ｇ?；?ｗ??ｒ９?３?—９?三??｜｜Ｈｆ?８?２?——８??８?＇ｉ?ｚｎ￣８．：??Ｋ：?－７?ｌ?—７?ｌ?—１??２?２?＾?＿?ｄ；??１１?■?ｉ?ｉ：?ｉ??ｆ?￣??Ａ?Ｂ?Ｃ??图１－２?ｔ－ＰＲＰ和ｃ－ＰＲＰ制备的过程（箭头所指均为ｔ－ＰＲＰ）?？全血（Ａ），第一次离心??后（Ｂ），第二次离心后（Ｃ）。与ｃ－ＰＲＰ组相比，ｔ－ＰＲＰ组的红细胞、白细胞与血浆的界??限更清晰，可见第一次离心后与第二次离心后的血浆中红细胞混杂更少。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｈｅ?ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｔ－ＰＲＰ?（Ａｒｒｏｗ）?ａｎｄ?ｃ－ＰＲＰ．?Ｗｈｏｌｅ?ｂｌｏｏｄ?（Ａ），?ａｆｔｅｒ?ｔｈｅ??ｆｉｒｓｔ?ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ?（Ｂ），?ａｆｔｅｒ?ｔｈｅ?ｓｅｃｏｎｄ?ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ?（Ｃ）．?Ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｃ－ＰＲＰ，?ｔｈｅ??ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｒｅｄ?ｂｌｏｏｄ?ｃｅｌｌｓ，?ｗｈｉｔｅ?ｂｌｏｏｄ?ｃｅｌｌｓ?ａｎｄ?ｐｌａｓｍａ?ｗｅｒｅ?ｃｌｅａｒｅｒ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｔ－ＰＲＰ??ｇｒｏｕｐ

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本文编号：2891941