两株深海放线菌抗肿瘤活性成分研究

发布时间：2020-12-08 16:06

　　为了从深海来源的微生物中寻找发现具有抗肿瘤活性的次级代谢产物,我们对17株从中国海洋微生物菌种保藏中心（MCCC）申请得到的深海菌株,分别用9种不同的液体培养基与3种固体培养基,进行小规模发酵培养。发酵物用乙酸乙酯萃取三遍,浓缩得到粗浸膏。以人宫颈癌细胞（Hela-S3）,胰腺癌细胞（PANC-1）,肝癌细胞（Bel-7402）,膀胱癌细胞（BIU-87）,食管癌细胞（ECA-109）等5种肿瘤细胞为模型,使用MTT法对各小规模发酵粗浸膏进行抗肿瘤活性检测。结合MTT检测结果,薄层色谱分析与文献数据,确定厦门链霉菌Streptomyces xiamenensis MCCC 1A01570和拟诺卡氏菌Nocardiopsis sp.MCCC 1A03323为目标菌株,分别用A3和A5两种培养基经行40L的大规模发酵。大约两周后,将发酵液离心弃去菌丝体,发酵液用乙酸乙酯萃取三次,合并浓缩得到粗浸膏。利用ODS反相色谱柱,硅胶色谱柱,葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20,高效液相色谱等分离手段进行化合物的分离纯化。通过详细分析化合物的质谱数据,核磁数据等理化数据,结合文献确定化合物的结构... 

【文章来源】：广东药科大学广东省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

A01570（上）和1A00323（下）粗提物TLC分析结果

图 3-1 1A01570 放线菌化合物分离流程图.2.3 细胞培养和双荧光素酶报告基因试验核受体是一种配体依赖性的转录调节因子，广泛存在于多细胞生物的胞浆及胞核内，与相应配体和相关调节因子沟通作用，调控基因表达，从而在生物体新陈代谢，生长发育，细胞分化等上发挥重要作用。核受体家族成员众多，视醇 X 受体（RXR ）是其中重要的一员，其在调控肺癌，乳腺癌，肝癌和前列癌等癌细胞的增殖和凋亡中发挥着关键作用。除此，靶向 RXR 的专利药argretin 在 1999 年被 FDA 批准用于治疗皮肤 T 淋巴细胞瘤。基于以上的理论基，该实验设计了核受体 RXR 的报告基因筛选模型：RXR 促进活性和核受体XR 竞争性结合活性。该实验的目的是采用双报告基因的方法检测化合物是否影响 RXR 的转录活性，并初步探讨化合物是否可能存在与 RXR 结合的作。本研究采用的是萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase, FL）报告基因和海肾荧素酶（Rellina luciferase, RL）报告基因组成的双萤光素酶报告基因（Dualciferasereporter,DLR）检测系统。RL 报告基因作为内对照，使 FL 报告基因的

广东药科大学硕士研究生学位论文体存在竞争性促进作用。两者同时存在时，且随着化合物 2，3，13 的浓度增加，对 RXR 受体的促进作用越弱，为 RXR 受体的部分激动剂。化合物 4 则表现为非竞争性促进作用，随着浓度增加，对 RXR 受体促进作用越强。

【参考文献】：
期刊论文
[1]一株地衣内生细菌的代谢产物[J]. 范琳,魏晓华.  中国抗生素杂志. 2016(07)
[2]酸藤果化学成分研究[J]. 杨林军,何明珍,黄文平,谢彦云,王琦,李艳,李志峰,冯育林,杨世林.  中国药学杂志. 2016(14)



本文编号：2905332