重组人碱性磷酸酶表达及其调节人白细胞释放TNF-α活性研究

发布时间：2021-01-20 08:12

　　为获得高纯度糖化蛋白人肠碱性磷酸酶（IAP）并研究其新生物活性和药学意义,采用黑曲菌和中国仓鼠卵巢细胞（CHO）表达嵌合人肠碱性磷酸酶（recAP）,获得稳定表达细胞株和高纯度recAP。recAP呈剂量依赖型灭活内毒素（LPS）,使致炎物质ATP脱磷产生终产物腺苷。利用新鲜提取的人类白细胞和脐静脉内皮细胞系（HUVECs）建立抗炎生物活性模型。ELISA结果表明,recAP在LPS存在或不存在情况下均明显抑制TNF-α分泌,ATP脱磷终产物腺苷明显抑制TNF-α分泌。非LPS依赖的recAP抑制人类白细胞TNF-α分泌是一种碱性磷酸酶新活性测定方法。 

【文章来源】：东北农业大学学报. 2020,51(03)北大核心

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【部分图文】：

蛋白HPLC检测

以pMD 19T-AP质粒为模板基因片段。连接转化后，大肠杆菌转化子双酶切鉴定。测序正确质粒命名为p MD 19T-ChimAP（见图1）。2.1.2 碱性磷酸酶表达载体构建

用XbaⅠ和HindⅢ鉴定黑曲霉表达载体pSZH-ChimAP时，电泳结果显示1 500 bp,15 000 bp片段，下一步通过根癌农杆菌介导转入黑曲霉鉴定，如图2A所示。同理，用Eco RⅠ和NotⅠ鉴定CHO表达载体pMH3-ChimAP时，电泳结果显示出1 500、8 453 bp片段，下一步转入CHO细胞中筛选，如图2B所示。2.1.3 重组黑曲霉菌株筛选及鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]多拷贝脂肪酶基因在黑曲霉中表达研究[J]. 李杰,张贺,王欣,黄超群,徐玥,张会,刘天奇.  东北农业大学学报. 2018(04)
[2]乐复能对LPS介导的健康人外周血单核细胞分泌TNF-α的影响及其机制[J]. 李富军,薛梅,卢放根,邹益友.  中南大学学报(医学版). 2013(01)



本文编号：2988702