BF12对宫颈癌和乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及机制初探
发布时间：2021-03-27 12:57
目的:研究苯并呋喃类化合物--BF12[（E）-3-（6-甲氧基-2-（1-（3,4,5-三甲氧基苯基）乙烯基）苯并呋喃-5-基）甲酸]对宫颈癌细胞（SiHa、HeLa）和乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-231）增殖、凋亡的影响及机制初探。方法:（1）MTT试验对四种癌细胞进行IC50测定;（2）BF12处理后,PI检测细胞周期分布,Western Blot（WB）及免疫荧光（IF）检测细胞内微管聚合情况;（3）小管成形实验及酶联免疫吸附试验（ELISA）检测BF12对肿瘤血管影响;（4）Hoechst观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI检测凋亡诱导作用;（5）WB检测PI3K/Akt/mTOR通路及凋亡相关蛋白表达,Autodock vina软件对BF12和PI3K（α、γ、δ、β）进行分子对接,划痕实验观察乳腺癌细胞迁移情况;（6）IF、电镜及WB检测乳腺癌细胞自噬现象。结果:（1）BF12对SiHa/HeLa/MCF-7/MDA-MB-231的IC50分别是1.10/1.06/0.89/4.77μM;（2）BF12选择...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线图
春衔锏腦-ray晶体结构（PDB编号:6G6W，分辨率：2.72）。人PI3K蛋白含有A和B两条链，A链为催化亚基，B链为调节亚基。用PyMoL1.7.6提取其中的A链，分别含1单元的PI3Kα蛋白和1分子3K6配体结构、1单元的PI3Kγ蛋白和1分子4FJ配体结构、1单元的PI3Kδ蛋白和1分子EO5配体结构。因在RCSBProteinDataBank中未找到PI3Kβ蛋白，故采用计算机模拟。接着使用AutodockTools1.5.6删除水分子、添加极性氢和电荷，最后转化为PDBQT格式。1.2.8.2配体结构准备首先用ChemDraw画出BF12的结构，然后转化为三维结构（图1-3），用于分子对接。图1-3BF12的平面(left)和立体(right)结构Fig1-3Planar(left)andthree-dimensional(right)structuresofBF121.2.9WB实验1.2.9.1蛋白提取取对数生长期的SiHa和HeLa细胞以3105个/ml的密度均匀接种于六孔板，过夜后用BF12、CA-4和/或PTX处理细胞24h，每孔加入60μLRIPI裂解液（RIPI:蛋白酶抑制剂:磷酸酶抑制剂=100:1:1)，冰上裂解30min，用刮刀刮取细胞后移到1.5mLEp管中，间断涡旋5次，每次30s，然后4oC,13000r/min离心10min，收集上清液，置于冰上备用。参考文献[53,54]方法分别提取聚合态和游离态微管蛋白。药物干预后，用预热至37oC的微管蛋白缓冲液MTSB洗涤两次，加入70μLMTSB，37oC恒温箱避光裂解10min，刮刀刮取细胞，14000r/min室温离心10min，取上清，即为游离态微管蛋白悬液。在剩余的沉淀中加入RIPA裂解液，冰上裂解30min，4oC,12000r/min离心20min，取上清，即为聚合态微管蛋白悬液。1.2.9.2蛋白定量（1）按照说明书，取20μL25mg/mL蛋白标准溶液+980μLPBS得到0.5mg/mL蛋白工作液。（2）按照现用现配的原则，A液:B液=50:1配制适量BCA工作液。（3）蛋白浓度检测蛋白工作液加入量如下表1-9。1.2.8.1受体结构?
化合物BF12与CA-4处理SiHa和HeLa细胞24h后的细胞周期实验结果图
【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国肿瘤临床》文章荐读：hrHPV DNA载量分型和E6蛋白对宫颈癌前病变进展的预测作用[J]. 本刊编辑部. 中国肿瘤临床. 2019(17)
[2]线粒体动力学与细胞凋亡[J]. 郑凯,杨梅桂,闫朝君,汤明亮,宋质银. 中国细胞生物学学报. 2019(08)
[3]miR-21对MCF7乳腺癌细胞增殖及VEGF和HIF-1α表达的影响[J]. 石岩,秦岩,赵明慧,洪丹,李建华,宋磊. 中国医师杂志. 2019(08)
[4]阻断VEGF/VEGFR-2信号传导促进乳腺癌TAM向M1表型极化[J]. 何少忠,毛亚婷,王群,廖桂祥. 医疗装备. 2019(15)
[5]苦参碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路促进非小细胞肺癌A549细胞的自噬和凋亡[J]. 郝艳梅,殷红梅,朱超莽,李凤,张英杰,李玉云,王效静,李多杰. 南方医科大学学报. 2019(07)
[6]二代测序检测乳腺癌PIK3CA、TP53、PTEN基因突变及其临床意义[J]. 陆琦然,刘建夏,於恩桥,孙洁. 中国现代普通外科进展. 2019(07)
[7]抑制miR-30a/HMGA2介导的骨肉瘤细胞自噬对化学药物治疗诱导的细胞凋亡的作用[J]. 夏勤,倪江东,黄俊,潘柏祺,严明明,李文钊. 中南大学学报(医学版). 2019(07)
[8]三阴性乳腺癌靶向治疗进展[J]. 董国雷,赵伟鹏,佟仲生. 中国肿瘤临床. 2019(12)
[9]应激对小鼠乳腺癌生长转移的作用及机制[J]. 芦婷婷,胡颖芸,张提,秦君芳. 解放军医学杂志. 2019(06)
[10]胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞自噬的影响及其作用机制研究[J]. 杨红,周杰,阳晓晴. 中国临床药理学与治疗学. 2019(05)
博士论文
[1]IL-35在乳腺癌浸润淋巴细胞中表达的临床意义及其对乳腺癌细胞生物学功能的影响[D]. 赵中华.山东大学 2016
硕士论文
[1]新型微管靶向解聚剂DHPAC对肿瘤微环境中血管生成以及拟态血管生成的抑制作用与机制研究[D]. 巩福莲.山东大学 2019
[2]ELB对乳腺癌的抗血管生成及生长抑制作用研究[D]. 杨喜燕.郑州大学 2019
[3]丹参酮Ⅰ通过诱导细胞凋亡和自噬抑制肿瘤细胞增殖的体外研究[D]. 张英.中国中医科学院 2017
[4]微管蛋白抑制剂CombretastatinA-4的苯并[b]呋喃类衍生物的合成及抗肿瘤活性研究[D]. 范晔.新疆医科大学 2017
[5]抗VEGF单克隆抗体BD0801单药及联合5-FU体外抑制HCC细胞SMMC-7721增殖及抗血管生成作用的研究[D]. 罗诺.东南大学 2016
[6]新型微管靶向抑制剂LL-01和LL-02抗肿瘤活性与机制研究[D]. 王静静.山东大学 2016
[7]细胞中微管结构解聚的生物力学研究[D]. 潘英挚.兰州大学 2016
[8]PI3K/AKT/mTOR信号通路生物标记物状态与乳腺癌二线抗HER2治疗相关研究[D]. 杜歌.中国人民解放军军事医学科学院 2015
[9]新型茚并吡唑类微管蛋白抑制剂的设计、合成及活性研究[D]. 刘晏娜.山东大学 2015
[10]miR-200b对乳腺癌细胞增殖迁移和侵袭的影响及机制研究[D]. 郑琴.大连医科大学 2015
本文编号：3103549
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线图
春衔锏腦-ray晶体结构（PDB编号:6G6W，分辨率：2.72）。人PI3K蛋白含有A和B两条链，A链为催化亚基，B链为调节亚基。用PyMoL1.7.6提取其中的A链，分别含1单元的PI3Kα蛋白和1分子3K6配体结构、1单元的PI3Kγ蛋白和1分子4FJ配体结构、1单元的PI3Kδ蛋白和1分子EO5配体结构。因在RCSBProteinDataBank中未找到PI3Kβ蛋白，故采用计算机模拟。接着使用AutodockTools1.5.6删除水分子、添加极性氢和电荷，最后转化为PDBQT格式。1.2.8.2配体结构准备首先用ChemDraw画出BF12的结构，然后转化为三维结构（图1-3），用于分子对接。图1-3BF12的平面(left)和立体(right)结构Fig1-3Planar(left)andthree-dimensional(right)structuresofBF121.2.9WB实验1.2.9.1蛋白提取取对数生长期的SiHa和HeLa细胞以3105个/ml的密度均匀接种于六孔板，过夜后用BF12、CA-4和/或PTX处理细胞24h，每孔加入60μLRIPI裂解液（RIPI:蛋白酶抑制剂:磷酸酶抑制剂=100:1:1)，冰上裂解30min，用刮刀刮取细胞后移到1.5mLEp管中，间断涡旋5次，每次30s，然后4oC,13000r/min离心10min，收集上清液，置于冰上备用。参考文献[53,54]方法分别提取聚合态和游离态微管蛋白。药物干预后，用预热至37oC的微管蛋白缓冲液MTSB洗涤两次，加入70μLMTSB，37oC恒温箱避光裂解10min，刮刀刮取细胞，14000r/min室温离心10min，取上清，即为游离态微管蛋白悬液。在剩余的沉淀中加入RIPA裂解液，冰上裂解30min，4oC,12000r/min离心20min，取上清，即为聚合态微管蛋白悬液。1.2.9.2蛋白定量（1）按照说明书，取20μL25mg/mL蛋白标准溶液+980μLPBS得到0.5mg/mL蛋白工作液。（2）按照现用现配的原则，A液:B液=50:1配制适量BCA工作液。（3）蛋白浓度检测蛋白工作液加入量如下表1-9。1.2.8.1受体结构?
化合物BF12与CA-4处理SiHa和HeLa细胞24h后的细胞周期实验结果图
【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国肿瘤临床》文章荐读：hrHPV DNA载量分型和E6蛋白对宫颈癌前病变进展的预测作用[J]. 本刊编辑部. 中国肿瘤临床. 2019(17)
[2]线粒体动力学与细胞凋亡[J]. 郑凯,杨梅桂,闫朝君,汤明亮,宋质银. 中国细胞生物学学报. 2019(08)
[3]miR-21对MCF7乳腺癌细胞增殖及VEGF和HIF-1α表达的影响[J]. 石岩,秦岩,赵明慧,洪丹,李建华,宋磊. 中国医师杂志. 2019(08)
[4]阻断VEGF/VEGFR-2信号传导促进乳腺癌TAM向M1表型极化[J]. 何少忠,毛亚婷,王群,廖桂祥. 医疗装备. 2019(15)
[5]苦参碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路促进非小细胞肺癌A549细胞的自噬和凋亡[J]. 郝艳梅,殷红梅,朱超莽,李凤,张英杰,李玉云,王效静,李多杰. 南方医科大学学报. 2019(07)
[6]二代测序检测乳腺癌PIK3CA、TP53、PTEN基因突变及其临床意义[J]. 陆琦然,刘建夏,於恩桥,孙洁. 中国现代普通外科进展. 2019(07)
[7]抑制miR-30a/HMGA2介导的骨肉瘤细胞自噬对化学药物治疗诱导的细胞凋亡的作用[J]. 夏勤,倪江东,黄俊,潘柏祺,严明明,李文钊. 中南大学学报(医学版). 2019(07)
[8]三阴性乳腺癌靶向治疗进展[J]. 董国雷,赵伟鹏,佟仲生. 中国肿瘤临床. 2019(12)
[9]应激对小鼠乳腺癌生长转移的作用及机制[J]. 芦婷婷,胡颖芸,张提,秦君芳. 解放军医学杂志. 2019(06)
[10]胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞自噬的影响及其作用机制研究[J]. 杨红,周杰,阳晓晴. 中国临床药理学与治疗学. 2019(05)
博士论文
[1]IL-35在乳腺癌浸润淋巴细胞中表达的临床意义及其对乳腺癌细胞生物学功能的影响[D]. 赵中华.山东大学 2016
硕士论文
[1]新型微管靶向解聚剂DHPAC对肿瘤微环境中血管生成以及拟态血管生成的抑制作用与机制研究[D]. 巩福莲.山东大学 2019
[2]ELB对乳腺癌的抗血管生成及生长抑制作用研究[D]. 杨喜燕.郑州大学 2019
[3]丹参酮Ⅰ通过诱导细胞凋亡和自噬抑制肿瘤细胞增殖的体外研究[D]. 张英.中国中医科学院 2017
[4]微管蛋白抑制剂CombretastatinA-4的苯并[b]呋喃类衍生物的合成及抗肿瘤活性研究[D]. 范晔.新疆医科大学 2017
[5]抗VEGF单克隆抗体BD0801单药及联合5-FU体外抑制HCC细胞SMMC-7721增殖及抗血管生成作用的研究[D]. 罗诺.东南大学 2016
[6]新型微管靶向抑制剂LL-01和LL-02抗肿瘤活性与机制研究[D]. 王静静.山东大学 2016
[7]细胞中微管结构解聚的生物力学研究[D]. 潘英挚.兰州大学 2016
[8]PI3K/AKT/mTOR信号通路生物标记物状态与乳腺癌二线抗HER2治疗相关研究[D]. 杜歌.中国人民解放军军事医学科学院 2015
[9]新型茚并吡唑类微管蛋白抑制剂的设计、合成及活性研究[D]. 刘晏娜.山东大学 2015
[10]miR-200b对乳腺癌细胞增殖迁移和侵袭的影响及机制研究[D]. 郑琴.大连医科大学 2015
本文编号：3103549
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