玻尿酸-聚乳酸纳米粒子包覆候选药物用于抗骨质疏松的体外研究

发布时间：2021-05-17 16:06

　　微生物代谢产物是新药研究与开发的资源宝库,相比与植物,微生物具有可以快速繁殖的特点,满足了有效化合物大量生产的需求。日本学者从茭白黑粉菌中发现一种具有抗破骨细胞活性的化合物Stigmastane-3-6-dione,分子式为C₂₉H₂₈O₂,抗破骨细胞的分化率达到49%,国内山东大学学者从玉米黑粉菌中分离出一些甾体类化合物与日本学者分析出的化合物结构相近,但未做活性研究,本实验希望通过对玉米黑粉菌代谢化合物进行分离,再利用具有亲水亲油两性的玻尿酸-聚乳酸药物载体包覆具备抗破骨细胞活性的玉米黑粉菌代谢产物进行骨质疏松治疗的基础研究。（1）以摇瓶的方式发酵生产玉米黑粉菌,将菌液以6000 rpm/min离心5min,取上清液加入1.2倍乙酸乙酯,萃取3次,取有机层,减压浓缩机抽干,利用1cm硅胶管柱进行柱层析,流动相为石油醚:乙酸乙酯,设置四个梯度分别为1:0、6:1、2:1、0:1,经TLC面相确认合并后得12个成分,分别命名为Fr1-Fr12。将Fr2、Fr5、Fr6、Fr7利用制备级HPLC结和RP-18管柱分离分别收... 

【文章来源】：华侨大学福建省

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第1章 前言
    1.1 骨质疏松概述
        1.1.1 骨质疏松症及其研究现状
        1.1.2 骨质疏松症的治疗
    1.2 玉米黑粉菌的简介
        1.2.1 玉米黑粉菌的来源及分类
        1.2.2 玉米黑粉菌的生长条件
        1.2.3 玉米黑粉菌的营养及药用价值
    1.3 阿仑膦酸钠简介
        1.3.1 阿仑膦酸钠
        1.3.2 阿仑膦酸钠片剂
    1.4 生物可降解材料
        1.4.1 玻尿酸
        1.4.2 聚乳酸
    1.5 研究目的及主要研究内容
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 主要研究内容
第2章 玉米黑粉菌的发酵及化学成分分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株来源
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 主要实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 菌株的扩大培养
        2.2.2 摇瓶实验
        2.2.3 5L发酵试验
        2.2.4 柱层析分离
        2.2.5 TLC分析
        2.2.6 HPLC分析
        2.2.7 Mass分析
        2.2.8 NMR分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 玉米黑粉菌的生长曲线
        2.3.2 5L发酵槽发酵玉米黑粉菌
        2.3.3 产物萃取及分离
        2.3.4 TLC分析结果
        2.3.5 HPLC分析结果
        2.3.6 Mass分析结果
        2.3.7 二次Mass分析结果
        2.3.8 NMR分析结果
        2.3.9 Stigmastane-3,6-dione 结构
    2.4 小结
第3章 玉米黑粉菌所分离化学成分的活性检测
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞系
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 主要实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养基的配置
        3.2.2 细胞培养
        3.2.3 细胞存活率分析(MTT法)
        3.2.4 TRAP染色
    3.3 实验结果
        3.3.1 不同化合物对RAW264.7细胞存活率的影响
        3.3.2 不同化合物对Hela细胞存活率的影响
        3.3.3 不同化合物对A549细胞存活率的影响
        3.3.4 不同化合物对破骨细胞分化的影响
    3.4 小结
第4章 HA-PLA纳米粒子的合成及特性评价
    4.1 实验材料
        4.1.1 玻尿酸及聚乳酸来源
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 主要实验仪器
    4.2 试验方法
        4.2.1 HA的水解
        4.2.2 HA-TBA 的合成
        4.2.3 PLA上修饰NHS
        4.2.4 HA-PLA的合成
        4.2.5 制备包覆荧光分子的纳米粒子
        4.2.6 纳米粒子的特性评价
    4.3 实验结果
        4.3.1 酸水解玻尿酸结果
        4.3.2 HA-TBA的合成结果
        4.3.3 HA-PLA的合成结果
        4.3.4 HA-PLA纳米粒子的粒径分析
        4.3.5 HA-PLA纳米粒子Zeta电位分析
        4.3.6 HA-PLA纳米粒子扫描电子显微镜图
    4.4 小结
第5章 载药HA-PLA纳米粒子抗骨质疏松的体外研究
    5.1 实验材料
        5.1.1 细胞系
        5.1.2 实验试剂
        5.1.3 主要实验仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 载药纳米粒子的制备
        5.2.2 MTT法检测HA-PLA纳米粒子对RAW264.7细胞存活率的影响
        5.2.3 TRAP染色检测纳米粒子对破骨细胞分化的影响
    5.3 实验结果
        5.3.1 MTT法检测各化合物对RAW264.7细胞存活率的影响结果
        5.3.2 TRAP染色检测纳米粒子对破骨细胞分化的影响结果
    5.4 小结
总结与展望
参考文献
附录 不同分子量Dextran标准品的GPC图谱
致谢
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]米诺膦酸水合物[J]. 赵丽嘉,王利华,胡雅萍,徐颂,陈常青.  药物评价研究. 2010(06)
[2]具有药用价值的植物病原真菌[J]. 陈利军,史洪中,陈月华,尹健.  时珍国医国药. 2007(03)
[3]聚乳酸合成研究现状及展望[J]. 崔英德,廖列文,康正.  精细化工. 1999(05)

博士论文
[1]四种药用植物和一种真菌的化学成分及生物活性研究[D]. 王姝麒.山东大学 2011

硕士论文
[1]甲醇—水体系过渡金属Y型分子筛催化合成昆布氨酸[D]. 倪偲.青岛大学 2014
[2]骨质疏松椎体压缩性骨折术后再骨折的危险因素分析[D]. 芦虎.广州医科大学 2014



本文编号：3192050