靶向启动子和mRNA 3’UTR的Cripto-1表达抑制剂筛选及其抗肿瘤活性研究

发布时间：2021-05-24 02:44

　　近年来,恶性肿瘤的发病率和死亡率居高不下,影响了人们的身体健康。尽管目前有很多治疗恶性肿瘤的方法,比如手术治疗、放射治疗、化学治疗,但是均存在很多不足,而药物靶向治疗由于其特异性强,毒副作用小,给药剂量少等优势,逐渐成为治疗恶性肿瘤的主要方法。但目前靶向药物所针对的靶点,仍然存在特异性不高、肿瘤靶向性不强等缺点,因此需要寻找在肿瘤细胞上特异性高表达的靶点。Cripto-1是一个典型的癌基因,在细胞的迁移、侵袭以及血管生成中发挥重要作用。并且Cripto-1在人正常组织细胞中低表达或不表达,而在一些恶性肿瘤细胞中异常高表达,因此Cripto-1可作为筛选抗肿瘤药物的有效靶点。1.靶向启动子和mRNA 3’UTR的Cripto-1表达抑制剂的筛选及鉴定在本论文中,我们通过PCR技术在Hela细胞扩增了Cripto-1启动子区域,并且将它与载体pGL3-basic进行连接,成功构建了pGL3-Cripto-1启动子荧光素酶报告载体,经检测发现我们所钓取的Cripto-1启动子片段具有比较高的启动子活性,能够进行后续的化合物初筛复筛实验。之后,我们将Cripto-1启动子和之前构建的Cript... 

【文章来源】：东北师范大学吉林省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一部分 文献综述
    一、恶性肿瘤的治疗方法
        (一)手术治疗
        (二)放射治疗
        (三)免疫治疗
        (四)药物治疗
    二、恶性肿瘤的发生机制
        (一)外源性因素
        (二)内源性因素
        (三)原癌基因在肿瘤发生中的作用
    三、Cripto-1的研究进展
        (一)Cripto-1概述
        (二)Cripto-1与肿瘤的关系
        (三)Cripto-1基因的表达调控
    四、真核基因的表达调控
        (一)转录前水平的调控
        (二)转录水平的调控
        (三)转录后水平的调控
        (四)翻译水平的调控
        (五)翻译后水平的调控
    五、研究目的及意义
第二部分 材料与方法
    一、实验仪器和材料
        (一)实验仪器
        (二)实验试剂及材料
        (三)溶液的配制
    二、实验方法
        (一)细胞培养相关方法
        (二)Cripto-1启动子的钓取
        (三)pGL3-Cripto-1启动子荧光素酶报告载体的构建与鉴定
        (四)pGL3-Cripto-1启动子荧光素酶报告载体的活性鉴定
        (五)Cripto-1表达抑制剂的筛选
        (六)蛋白免疫印迹分析
        (七)MTT检测
        (八)细胞形态观察
        (九)BrdU掺入实验
        (十)细胞周期检测
        (十一)DAPI染色
        (十二)细胞凋亡检测
        (十三)细胞划痕实验
第三部分 实验结果
    一、pGL3-Cripto-1启动子荧光素酶报告载体的构建及鉴定
        (一)pGL3-Cripto-1启动子荧光素酶报告载体的构建
        (二)Cripto-1启动子荧光素酶报告载体的鉴定
    二、靶向Cripto-1启动子的化合物筛选
        (一)抑制Cripto-1表达的化合物的初步筛选
        (二)抑制Cripto-1表达的化合物的复筛
        (三)候选化合物对Cripto-1表达的影响
    三、靶向Cripto-1mRNA3'UTR的化合物筛选
        (一)抑制Cripto-1表达的化合物的初步筛选
        (二)抑制Cripto-1表达的化合物的复筛
        (三)候选化合物对Cripto-1表达的影响
    四、化合物T150、T173的体外抗肿瘤作用研究
        (一)T150、T173对肿瘤细胞活力的影响
        (二)T150、T173对肿瘤细胞形态的影响
        (三)T150、T173对肿瘤细胞增殖能力的影响
        (四)T150、T173对肿瘤细胞凋亡的影响
        (五)T150、T173对肿瘤细胞迁移能力的影响
    五、过表达Cripto-1对T150、T173抗肿瘤作用的影响
第四部分 讨论
    一、pGL3-Cripto-1启动子荧光素酶报告载体的构建和化合物筛选
    二、T150、T173的体外抗肿瘤活性研究
第五部分 结论
参考文献
附录
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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[2]肝尾状叶肿瘤的手术治疗（附50例报告）[J]. 余昆,熊伟,李云峰,高屹,栗明.  山东医药. 2012(18)
[3]经岩骨乙状窦前入路显微外科手术治疗老年岩斜区肿瘤的效果及术后并发症[J]. 欧明亮,张贵升,陈军辉.  中国老年学杂志. 2011(20)
[4]肿瘤抑制因子-P53的翻译后水平修饰[J]. 那日苏,刘长青,陆涛峰,道尔吉,关伟军,马月辉.  中国畜牧兽医. 2008(09)
[5]后颅窝肿瘤手术治疗96例临床分析[J]. 邓星海,牟永告,张湘衡,赛克,魏大年,王涤宇,谢海涛,陈忠平.  广东医学. 2008(01)
[6]癌症发生机理的研究进展[J]. 戴玉锦.  生物学杂志. 2004(06)
[7]原核生物和真核生物的基因组及其基因表达调控的比较研究[J]. 林元山.  怀化师专学报. 2002(05)

硕士论文
[1]miRNA对Cripto-1高表达的肿瘤细胞增殖及侵袭的调控作用及机制研究[D]. 魏霞.东北师范大学 2016



本文编号：3203408