海洋源降胆固醇乳酸菌的筛选及其功能研究
发布时间：2021-08-04 06:16
伴随着当今社会人们的快节奏生活,由于胆固醇摄入过量引发的心脑血管疾病日益高发并严重威胁人类健康和生命。药物治疗是当前有效医治方式,但伴随着一系列副作用且效果不稳定,微生态制剂辅助药物治疗是一种安全有效的降血清胆固醇手段。本论文从生活在海平面300米以深大型海洋哺乳动物柏式中喙鲸内脏中分离出一株具高效降胆固醇功能的乳酸菌HJ-S2,从生长、益生、安全三方面特性对目标菌株进行综合评价研究,优化其发酵条件,从不同角度探讨其体外降解机制,最后构建高脂小鼠模型评估其在体内发挥的作用,以期为开发新型功能微生态制剂提供理论参考。实验结果如下:（1）菌株的分离筛选及性能研究。采用传统乳酸菌筛选法联合邻苯二甲醛法从喙鲸内脏中得到一株体外胆固醇降解率达48.82±0.21%的乳酸菌,且分泌胆盐水解酶,经鉴定为植物乳杆菌,并命名为HJ-S2（NCBI登录号:MK248728;CGMCC No:17720）,构建了其进化发育树。对目标菌株HJ-S2进行三方面性能研究,首先研究了菌株HJ-S2生长特性,测定了菌株的生长曲线,HJ-S2具一定产酸能力且在衰亡期42 h时体外胆固醇降解率达到最高为45.06%。其次...
【文章来源】：自然资源部第三海洋研究所福建省
【文章页数】：94 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
内源性胆固醇合成途径Fig.1-1Synthesispathwayofendogenouscholesterol
第二章降胆固醇乳酸菌的筛选鉴定、性能研究及机制初探194.2菌株的BSH酶特性BSH酶是一种催化水解结合胆盐为氨基酸和游离胆盐（胆酸）的酶[86]，乳杆菌属和双歧杆菌属调节血清胆固醇水平的方式即是通过产BSH酶直接影响宿主胆盐代谢[74]。Jones[87]及Lambert等[88]对益生菌L.plantarum80和L.plantarumWCFS1的研究发现，菌体所分泌的BSH酶在降解过程中扮演重要角色。菌株所产BSH酶能分解胆盐成胆酸，与Ca2+结合成白色沉淀，可作为依据判断菌株是否具BSH活性的依据。对菌株HJ-S2进行BSH酶活测定，结果如图2-1所示，HJ-S2孔外圈出现白色沉淀，表明菌株具有BSH活性。图2-1菌株BSH酶活检测结果Fig.2-1Theresultofbilesalthydrolaseactivity4.3菌株的鉴定结果4.3.1形态学鉴定结果菌株HJ-S2在MRS平板上培养后，观察菌株形态如图2-2中A所示，HJ-S2菌落直径0.5~2.0mm，乳白色，规则圆形，有突起。菌株染色后的菌体形态如图2-2中B所示，长3.0~8.0μm，宽0.9~1.2μm，圆端直杆状，单个或成链状，为无芽孢的革兰氏阳性杆菌。
第二章降胆固醇乳酸菌的筛选鉴定、性能研究及机制初探20图2-2菌株HJ-S2的菌落和菌体形态图（×1000）Fig.2-2MorphologyofHJ-S2colonyandbacteria注：A、B分别为菌落和菌体的形态图。4.3.2API50CH鉴定结果按3.4.2方法对菌株HJ-S2进行糖类发酵鉴定。结果如表2-3所示。将49种糖类发酵结果在APIPlus库中进行归纳分析，鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum），将其命名为植物乳杆菌HJ-S2。表2-3乳酸菌HJ-S2API50CH鉴定结果Table2-3TheAPI50CHresultofstrainHJ-S2碳水化合物HJ-S2碳水化合物HJ-S2碳水化合物HJ-S2碳水化合物HJ-S2碳水化合物HJ-S2D-阿拉伯糖－D-龙胆二糖+D-蜜二糖－木糖醇－甲基-D-吡喃甘露糖苷－L-阿拉伯糖+D-甘露糖+D-海藻糖+水杨苷+甲基-D-吡喃葡萄糖苷－D-岩藻糖－D-来苏糖－D-塔格糖－山梨醇－甲基-β-D-吡喃木糖苷－L-岩藻糖－D-核糖+D-乳糖－S甘露醇+七叶灵柠檬酸铁铵+D-木糖－L-山梨糖－D-果糖+甘露醇－2-酮基-葡萄糖酸盐－L-木糖－L-鼠李糖－D-蔗糖+菊糖－5-酮基-葡萄糖酸盐+D-葡萄糖+D-麦芽糖+卫茅醇－淀粉+D-侧金盏花醇I－D-半乳糖+D-棉子糖－苦杏仁甙+糖原+N-乙酰-葡糖胺－D-土伦糖+D-松三糖+赤藻糖醇－ARBULIN+葡萄糖酸钾+D-纤维二糖+注：＋为阳性；-为阴性。
本文编号：3321169
【文章来源】：自然资源部第三海洋研究所福建省
【文章页数】：94 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
内源性胆固醇合成途径Fig.1-1Synthesispathwayofendogenouscholesterol
第二章降胆固醇乳酸菌的筛选鉴定、性能研究及机制初探194.2菌株的BSH酶特性BSH酶是一种催化水解结合胆盐为氨基酸和游离胆盐（胆酸）的酶[86]，乳杆菌属和双歧杆菌属调节血清胆固醇水平的方式即是通过产BSH酶直接影响宿主胆盐代谢[74]。Jones[87]及Lambert等[88]对益生菌L.plantarum80和L.plantarumWCFS1的研究发现，菌体所分泌的BSH酶在降解过程中扮演重要角色。菌株所产BSH酶能分解胆盐成胆酸，与Ca2+结合成白色沉淀，可作为依据判断菌株是否具BSH活性的依据。对菌株HJ-S2进行BSH酶活测定，结果如图2-1所示，HJ-S2孔外圈出现白色沉淀，表明菌株具有BSH活性。图2-1菌株BSH酶活检测结果Fig.2-1Theresultofbilesalthydrolaseactivity4.3菌株的鉴定结果4.3.1形态学鉴定结果菌株HJ-S2在MRS平板上培养后，观察菌株形态如图2-2中A所示，HJ-S2菌落直径0.5~2.0mm，乳白色，规则圆形，有突起。菌株染色后的菌体形态如图2-2中B所示，长3.0~8.0μm，宽0.9~1.2μm，圆端直杆状，单个或成链状，为无芽孢的革兰氏阳性杆菌。
第二章降胆固醇乳酸菌的筛选鉴定、性能研究及机制初探20图2-2菌株HJ-S2的菌落和菌体形态图（×1000）Fig.2-2MorphologyofHJ-S2colonyandbacteria注：A、B分别为菌落和菌体的形态图。4.3.2API50CH鉴定结果按3.4.2方法对菌株HJ-S2进行糖类发酵鉴定。结果如表2-3所示。将49种糖类发酵结果在APIPlus库中进行归纳分析，鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum），将其命名为植物乳杆菌HJ-S2。表2-3乳酸菌HJ-S2API50CH鉴定结果Table2-3TheAPI50CHresultofstrainHJ-S2碳水化合物HJ-S2碳水化合物HJ-S2碳水化合物HJ-S2碳水化合物HJ-S2碳水化合物HJ-S2D-阿拉伯糖－D-龙胆二糖+D-蜜二糖－木糖醇－甲基-D-吡喃甘露糖苷－L-阿拉伯糖+D-甘露糖+D-海藻糖+水杨苷+甲基-D-吡喃葡萄糖苷－D-岩藻糖－D-来苏糖－D-塔格糖－山梨醇－甲基-β-D-吡喃木糖苷－L-岩藻糖－D-核糖+D-乳糖－S甘露醇+七叶灵柠檬酸铁铵+D-木糖－L-山梨糖－D-果糖+甘露醇－2-酮基-葡萄糖酸盐－L-木糖－L-鼠李糖－D-蔗糖+菊糖－5-酮基-葡萄糖酸盐+D-葡萄糖+D-麦芽糖+卫茅醇－淀粉+D-侧金盏花醇I－D-半乳糖+D-棉子糖－苦杏仁甙+糖原+N-乙酰-葡糖胺－D-土伦糖+D-松三糖+赤藻糖醇－ARBULIN+葡萄糖酸钾+D-纤维二糖+注：＋为阳性；-为阴性。
本文编号：3321169
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