光热响应性双载药红细胞膜纳米囊泡的抗肿瘤应用研究
发布时间：2021-08-18 22:58
近年来,将化疗药物和光敏剂整合至多功能的纳米载体中,以获得更优异的抗肿瘤疗效,同时降低化疗药物对正常组织的毒副作用,已经成为肿瘤治疗领域研究的热点。本研究借助天然红细胞膜的优异生物学特性,应用纳米共挤出工艺和配体修饰策略,构建了一种具有长循环和肿瘤靶向的新型光热响应性红细胞膜纳米囊泡双载药递释系统（DIRNPs）。该系统可特异性定位于肿瘤组织,释放化疗药物并对近红外线刺激迅速响应,可实现肿瘤化疗和热疗的优势结合,达到提升协同疗效的目的。本文主要研究内容如下:采用纳米沉积技术制备了负载双药（阿霉素和吲哚菁绿）的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）纳米粒,通过外层包被天然红细胞膜并表面修饰靶向性配体（DSPE-PEG2000-FA）和长循环配体（DSPE-PEG2000）,应用纳米挤出技术最终构建了具有光热响应性的红细胞膜纳米囊泡双载药递释系统（DIRNPs）。该纳米载药系统平均粒径为158.4±2.6 nm,表面电位为-5.79 mV,药物包封率为61.78±1.37%（阿霉素）和62.4±3.73%（吲哚菁绿）。研究结果表明,DIRNPs体系具有良好的光热转换效率,经近红外激光（1.5 ...
【文章来源】：广东药科大学广东省
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光热响应性红细胞膜纳米囊泡双载药递释系统的构建和治疗机制图
广东药科大学硕士研究生学位论文122.3结果和讨论2.3.1阿霉素的含量测定方法专属性考察：PLGA溶解性较差，为了破坏纳米粒充分提取药物，尝试了多种破坏溶剂，经对比发现乙腈可破坏PLGA基质，并沉淀红细胞膜蛋白，同时加入酸性溶液后可将微脱盐的阿霉素酸化，最终选择用乙腈：2%磷酸=10:9溶液作为溶剂破坏纳米粒。将各测定样品破坏提取后的上清液进行荧光扫描，结果如图2-1（A）所示。结果显示激发波长为490nm，发射波长为550nm时，PLGA材料和红细胞膜及配体修饰基团不会干扰阿霉素的含量测定，方法的专属性良好。标准曲线绘制：以阿霉素浓度为横坐标，其荧光强度值为纵坐标绘制浓度-荧光强度曲线。图2-2（B）结果显示阿霉素在0.5~6.0μg/mL范围内线性关系良好，线性方程为y=28.98164x+5.32108（R2=0.9998）。图2-1（A）盐酸阿霉素和各制剂的全波长扫描图谱，(B)盐酸阿霉素标准曲线图。精密度和回收率：将低中高三个浓度的DOX溶液连续测定三天，其日内和日间精密度的RSD值及纳米粒中DOX的回收率测定结果如表2-1所示,均符合测定要求。表2-1DOX精密度和回收率（n=5）C（μg/mL)RSDofintra-dayRSDofinter-dayAbsoluterecovery0.81.78%4.68%92.34±1.21%41.42%1.28%85.74±1.22%80.31%0.45%84.46±0.76%2.3.2吲哚菁绿的含量测定方法专属性考察：将吲哚菁绿和各含吲哚菁绿纳米制剂经有机试剂破坏后的上清液进行紫外-可见全波长扫描，图2-2（A）为其全波长扫描结果，结果显示测定
广东药科大学硕士研究生学位论文13波长为780nm时，PLGA和红细胞膜及各配体修饰基团并不会干扰药物吲哚菁绿的含量测定，此方法的专属性良好，因此可以确定吸收波长为780nm。ICG的标准曲线绘制:以系列ICG浓度为横坐标，ICG的OD值为纵坐标绘制浓度-吸光值曲线。图2-2（B）结果显示ICG在0.5～4.0μg/mL范围内线性关系良好，线性方程为y=0.21392x-0.01532（R2=0.99958）。图2-2吲哚菁绿和各制剂的全波长扫描图谱（A）；吲哚菁绿标准曲线图（B）2.3.3DNPs的制备及工艺考察本文采用改进的乳化溶剂挥发法——纳米沉积技术制备载药纳米粒。纳米沉积法的原理是将水溶性溶剂与另一脂溶性溶剂混合在一起作为油相，再将要包载的药物溶解或者分散于这一混合油相中，纳米沉积技术突出的特点是重复性好，得到的纳米粒粒径大小均匀，包封率高[76]。本文将聚合物PLGA与模型药物DOX搅拌制成单乳，采用探头超声进一步减小乳滴半径，超声之后室温条件下连续搅拌乳液使丙酮和二氯甲烷充分扩散进入连续相，并通过连续相和空气的界面蒸发，充分去除有机溶剂，使纳米粒缓慢固化，再经过清洗、离心超滤得到成品载药纳米粒混悬液。对工艺参数的单因素考察结果见表2-2。有机溶剂影响：二氯甲烷脂溶性强可以减少阿霉素在水中的分配比，从而提高纳米粒包封率，并且二氯甲烷沸点低，挥发快，可使聚合物快速沉淀包载药物，而丙酮水溶性好，药物在油相和水相可以很好地分散，制备的纳米粒粒径会比较校在实验过程中发现单独使用二氯甲烷作为有机相溶剂时，纳米粒的载药量和包封率较高，分别为8.616%、86.16%，但同时纳米粒粒径较大且纳米粒分布不均匀（131.1nm，PDI=0.204），而单用丙酮作为油相溶剂时粒径较小（100.7nm），但是载药量和包封率较低（LC%=4.257%，EE%=42.57%?
本文编号：3350785
【文章来源】：广东药科大学广东省
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光热响应性红细胞膜纳米囊泡双载药递释系统的构建和治疗机制图
广东药科大学硕士研究生学位论文122.3结果和讨论2.3.1阿霉素的含量测定方法专属性考察：PLGA溶解性较差，为了破坏纳米粒充分提取药物，尝试了多种破坏溶剂，经对比发现乙腈可破坏PLGA基质，并沉淀红细胞膜蛋白，同时加入酸性溶液后可将微脱盐的阿霉素酸化，最终选择用乙腈：2%磷酸=10:9溶液作为溶剂破坏纳米粒。将各测定样品破坏提取后的上清液进行荧光扫描，结果如图2-1（A）所示。结果显示激发波长为490nm，发射波长为550nm时，PLGA材料和红细胞膜及配体修饰基团不会干扰阿霉素的含量测定，方法的专属性良好。标准曲线绘制：以阿霉素浓度为横坐标，其荧光强度值为纵坐标绘制浓度-荧光强度曲线。图2-2（B）结果显示阿霉素在0.5~6.0μg/mL范围内线性关系良好，线性方程为y=28.98164x+5.32108（R2=0.9998）。图2-1（A）盐酸阿霉素和各制剂的全波长扫描图谱，(B)盐酸阿霉素标准曲线图。精密度和回收率：将低中高三个浓度的DOX溶液连续测定三天，其日内和日间精密度的RSD值及纳米粒中DOX的回收率测定结果如表2-1所示,均符合测定要求。表2-1DOX精密度和回收率（n=5）C（μg/mL)RSDofintra-dayRSDofinter-dayAbsoluterecovery0.81.78%4.68%92.34±1.21%41.42%1.28%85.74±1.22%80.31%0.45%84.46±0.76%2.3.2吲哚菁绿的含量测定方法专属性考察：将吲哚菁绿和各含吲哚菁绿纳米制剂经有机试剂破坏后的上清液进行紫外-可见全波长扫描，图2-2（A）为其全波长扫描结果，结果显示测定
广东药科大学硕士研究生学位论文13波长为780nm时，PLGA和红细胞膜及各配体修饰基团并不会干扰药物吲哚菁绿的含量测定，此方法的专属性良好，因此可以确定吸收波长为780nm。ICG的标准曲线绘制:以系列ICG浓度为横坐标，ICG的OD值为纵坐标绘制浓度-吸光值曲线。图2-2（B）结果显示ICG在0.5～4.0μg/mL范围内线性关系良好，线性方程为y=0.21392x-0.01532（R2=0.99958）。图2-2吲哚菁绿和各制剂的全波长扫描图谱（A）；吲哚菁绿标准曲线图（B）2.3.3DNPs的制备及工艺考察本文采用改进的乳化溶剂挥发法——纳米沉积技术制备载药纳米粒。纳米沉积法的原理是将水溶性溶剂与另一脂溶性溶剂混合在一起作为油相，再将要包载的药物溶解或者分散于这一混合油相中，纳米沉积技术突出的特点是重复性好，得到的纳米粒粒径大小均匀，包封率高[76]。本文将聚合物PLGA与模型药物DOX搅拌制成单乳，采用探头超声进一步减小乳滴半径，超声之后室温条件下连续搅拌乳液使丙酮和二氯甲烷充分扩散进入连续相，并通过连续相和空气的界面蒸发，充分去除有机溶剂，使纳米粒缓慢固化，再经过清洗、离心超滤得到成品载药纳米粒混悬液。对工艺参数的单因素考察结果见表2-2。有机溶剂影响：二氯甲烷脂溶性强可以减少阿霉素在水中的分配比，从而提高纳米粒包封率，并且二氯甲烷沸点低，挥发快，可使聚合物快速沉淀包载药物，而丙酮水溶性好，药物在油相和水相可以很好地分散，制备的纳米粒粒径会比较校在实验过程中发现单独使用二氯甲烷作为有机相溶剂时，纳米粒的载药量和包封率较高，分别为8.616%、86.16%，但同时纳米粒粒径较大且纳米粒分布不均匀（131.1nm，PDI=0.204），而单用丙酮作为油相溶剂时粒径较小（100.7nm），但是载药量和包封率较低（LC%=4.257%，EE%=42.57%?
本文编号：3350785
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