利拉鲁肽增加MANF对胰岛β细胞的保护作用及可能的机制

发布时间：2021-08-18 23:30

　　第一部分:MANF通过促进自噬,减少内质网应激对胰岛β细胞的损害目的:探讨高糖高脂对人体血清MANF的影响以及在GLU、PA和TG诱导的内质网应激（ERS）下,MANF是否能促进自噬,减轻ERS,保护胰岛β细胞。方法:从重庆医科大学附属第二医院内分泌门诊及体检中心收集60例健康对照（NC）、40例单纯高脂血症（HLD）及71例新诊2型糖尿病（T2DM）人群的血清标本。用人源性MANF ELISA试剂盒检测血清中MANF水平。利用课题组前期储备的胰岛组织切片,进行免疫组化实验,验证MANF在胰岛中的表达。同时用小鼠胰岛β细胞株MIN6进行体外实验,利用不同浓度的GLU,PA和TG处理MIN6细胞24 h后,用Western blotting技术检测MANF、ERS、自噬及凋亡蛋白的变化,用CCK8检测细胞增殖,以及Hoechst联合免疫荧光技术检测凋亡现象。用PA处理MIN6细胞24 h后,用透射电镜（TEM）检测细胞内自噬小体和亚细胞结构变化。PA和TG联合自噬抑制剂CQ干预细胞后,用Western blotting检测MANF,ERS和自噬通路蛋白的表达。为了进一步探讨MANF与自噬... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

T2DM组、单纯高脂血症组、正常对照组血清MANF水平比较及T2DM亚组分析

重庆医科大学硕士研究生学位论文293.2GLU,PA，TG及GLU+PA刺激对小鼠胰岛β细胞表达MANF和Insulin蛋白的影响3.2.1MANF在小鼠胰腺组织上有表达，其中胰岛表达更明显在小鼠胰腺组织石蜡切片中，免疫组化实验检测到MANF在胰腺组织中的表达，且在胰岛上表达更明显，如图1.2所示。图1.2免疫组化检测小鼠胰腺中MANF的表达400×。Fig1.2MANFproteinexpressioninmousepancreas.3.2.2GLU,PA，TG及GLU+PA刺激下，小鼠胰岛β细胞表达MANF增加MIN6细胞在不同浓度的GLU、PA和TG培养基中培养24h，诱导MIN6细胞的内质网应激模型。Westernblotting检测随着GLU、PA和TG浓度的增加，MANF蛋白的表达呈浓度依赖性增加（P﹤0.05）(图1A、B、C)，且在高浓度的

重庆医科大学硕士研究生学位论文34PA(0.5mM/L)处理MIN6细胞24h后，透射电镜检测观察发现，PA处理组线粒体数量较对照BSA组明显增多（图1.7C,D），同时PA处理组MIN6细胞的内质网扩张明显如图1.7D绿色的方框所示，以及红色圆圈所示线粒体受损、膨胀和线粒体嵴明显减少。而对照BSA处理组未见明显异常（图1.7A,B）。损伤的线粒体扩张的内质网图1.7电镜下PA及BSA处理组的亚细胞结构Fig1.7SubcellularstructuresofPAandBSAtreatedgroupsunderelectronmicroscopy3.5GLU,PA和TG通过激活mTOR信号通路来抑制自噬之前的实验中，我们发现使用GLU、PA和TG处理MIN6细胞会增加p62表达。因此，我们也探讨了GLU、PA和TG处理MIN6细胞后，mTORC1是否会被激活。Westernblotting分析显示，mTORC1的激活与MIN6细胞中GLU、PA和TG的浓度有关，p-mTOR的表达呈GLU、PA和TG浓度依赖性增加（P﹤0.05）(图1.8A-C)。


本文编号：3350834