甲基苯丙胺促使α-突触核蛋白传递至星形胶质细胞的相关病理损伤机制研究

发布时间：2021-10-13 12:27

　　背景:甲基苯丙胺（METH）是一种高度成瘾的苯丙胺类精神刺激药物,在世界范围内被普遍滥用。长期滥用METH会导致神经元凋亡、线粒体功能障碍等问题。α-突触核蛋白（α-syn）是一种神经元蛋白,METH会引起α-syn过表达,从而造成多巴胺能神经元损伤。星形胶质细胞是中枢神经系统（CNS）中最大的神经胶质细胞群体,对于维持大脑稳态、保护神经元至关重要,METH作用后,脑内星形胶质细胞激活增生。研究发现α-syn在细胞间可以进行类阮蛋白式的传播,而星形胶质细胞是否在α-syn相关病理中起作用,以及具体的分子机制仍需进一步研究。目的:使用METH中毒体内外模型,检测星胶内α-syn表达量的变化,探究α-syn是否可以从神经元传递至星形胶质细胞;通过检测神经元细胞分泌的外泌体内α-syn表达量的变化,探究α-syn传递的方式;通过检测星胶内炎症因子及Nurr1表达量的变化,探究α-syn进入星形胶质细胞后星形胶质细胞产生的病理变化及分子机制。方法:第一章.建立小鼠METH慢性中毒小鼠模型、原代细胞模型以及SH-SY5Y细胞和U87MG细胞共培养模型,利用WB、IHC、IF等方法检测小鼠海马脑区... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞培养妯屮外泌体的分离及鉴定??５３??

ＩＬ６??４－．?３＞ｊ?３－ｉ??１?＊？?ｆ?＊?？?？??－？?３－?－ｆ—?Ｉ?Ｔ＂?－Ｓ?Ｊ．＿??ｉ?ｒ￣ｎ?ｉ２＇?ｒ＼?ｒ－?ｉ??ｔ２＇?５．?－ｒ－?Ｓ．?—??＞?ｒ＾Ｔ－?｜１－?？！［?ｒｎ＝ｎ?「＝１??ｌ１－?［＾ｎ?！?！??ａ：?ｃｔ?〇：??ＰＢＳ?ＰＢＳ?ＥＸＯ?ＭＥＴＨ?ＥＸＯ?ＰＢＳ?ＰＢＳ?ＥＸＯ?ＭＥＴＨ?ＥＸＯ?〇?ＰＢＳ?ＰＢＳ?ＥＸＯ?ＭＥＴＨ?ＥＸＯ??图２－３?ＭＥＴＨ組细胞外泌体可以增加星形胶质细胞中炎症因子的表达??Ｆｉｇ．?２－３?Ｅｘｏｓｏｍｅｓ?ｓｅｃｒｅｔｅｄ?ｂｙ?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ＭＥＴＨ?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｃａｎ?ｉｎｃｒｅａｓｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ??ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ?ｆａｃｔｏｒｓ?ｉｎ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ??２．４敲除ａ－ｓｙｎ后星形胶质细胞炎症反应缓解??为了验证ｃｘ－ｓｙｎ在ＭＥＴＨ组细胞外泌体诱导的星形胶质细胞炎症中所起的作??用，我们使用ａ－ｓｙｎ基因敲除（ＷＣ／ＴＡ）小鼠和野生型（ＨＴ）小鼠分离培养原??代神经元，使用ＰＢＳ或ＭＥＴ丨丨处理神经元２４?ｈ后提取外泌体。将这些外泌体添??加到星形胶质细胞培养基中。利用ＷＢ技术检测星形胶质细胞中促炎因子的表??达量。结果表明：相较于ＰＢＳ组，ＭＥＴＨ组细胞外泌体处理后，星形胶质细胞??炎症因子表达量明显升高；值得注意的是４?ＭＥＴＨ纟Ｕ?祌经几外泌体相比，??ＭＥＴＨ组５ＷＣＴＡ神经元外泌体作用］４丨形胶质细胞后，Ｍ形胶质细胞中炎症因??ｆ的表达Ｓ冇所下降（图２－４?Ａ－Ｉ））。丨：述结果

ｏ??ＳＮＣＡ，－?＋?＋??Ｃ?Ｄ??ＩＬ１－Ｐ?ＩＬ６??４ｎ?４－??０?？??１?３－?Ｔ?Ｉ?３－?＊＊＊??ｉ?Ｉ?＂＂＂?＃??Ｉ２＇?林?Ｉ２＇?ｒ＾－ｉ??｜?ｒ－—－，?｜??５?１－?，－＝－，?ｓ?１－?，??＂５?〇）??ａ：?ｔｒ??０?ＰＢＳ?ＭＥＴＨ?ＰＢＳ?ＭＥＴＨ?〇?ＰＢＳ?ＭＥＴＨ?ＰＢＳ?ＭＥＴＨ??Ｈ／ＴＥＸＯ?ＳＮＣＡ＇?ＥＸＯ?ＩＶ７ＥＸＯ?ＳＮＣＡ＇?ＥＸＯ??图２－４敲除ａ－ｓｙｎ可以缓解星形胶质细胞中的炎症反应??Ｆｉｇ．?２－４?Ｔｈｅ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｏｆ?ａ－ｓｙｎ?ｒｅｄｕｃｅｄ?ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ?ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ?ｉｎ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．??２．５外源性ａ－ｓｙｎ诱导星形胶质细胞产生炎症反应??为了进一步验证ａ－ｓｙｎ对星形胶质细胞炎症反应的作用，我们将体外重组??ａ－ｓｙｎ蛋白直接加入到星形胶质细胞的培养基中。利用ＷＢ技术检测星形胶质细??胞中ＴＮＦ－ａ、ＩＬｌ（３和ＩＬ６等炎症因子的表达１：。结果表明，相较于ＰＢＳ组ＭＥＴＨ??组和ａ－ｓｙｎ组星形胶质细胞中炎症因子的表达量均显著增加，而且当同时使用??ＭＥＴＨ和ａ－ｓｙｎ时，炎症因子表达增加量更大（图２－５?Ａ－Ｄ）。这些结果表明，ａ－ｓｙｎ??可以诱导星形胶质细胞产生炎症反应，并且与ＭＥＴＨ存在协同作用。??５６??

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3434665