基于人EGFR为靶点的萤光素酶报告系统的构建及在蒽醌类抗肿瘤药物筛选中的应用
发布时间：2021-12-16 21:21
目的1.构建EGFR启动子萤光素酶报告基因A549-EGFR-Luc2和CNE1-EGFR-Luc2稳转细胞模型;2.利用EGFR萤光素酶报告系统在转录水平筛选靶向调控EGFR抗肿瘤的候选化合物;3.探讨靶向调控EGFR与抗肿瘤活性的关系,为抗肿瘤药物设计、合成和开发提供新的策略。方法1、利用Western blot技术检测鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、肺癌及人鼻咽正常上皮细胞和乳腺正常细胞的EGFR蛋白表达水平,确定EGFR高表达活性的细胞作为研究对象。2、利用基因重组技术,构建含EGFR启动子的萤光素酶报告基因重组慢病毒表达载体,分别感染具有EGFR高表达活性的A549和CNE1细胞,获得稳定表达萤光素酶的A549-EGFR-Luc2和CNE1-EGFR-Luc2细胞系。3、通过萤光素酶实活性验对萤光素酶报告系统的关键条件进行优化,并检测化疗药物吉非替尼、顺铂、先导化合物大黄酸以及蒽醌化合物4a、B、C、H、I、J、K和N调控A549-EGFR-Luc2和CNE1-EGFR-Luc2细胞EGFR启动子的活性。4、MTT法确定化疗药物吉非替尼、顺铂、先导化合物大黄酸以及蒽醌化合物4a、B、...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：105 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
载体图谱
图 1-2 不同细胞内 EGFR 靶点表达水平，n=3.Fig1-2 The expression of EGFR in various cell lines.3.2 EGFR-promoter-Luc2 萤光素酶重组报告质粒鉴定含有 EGFR 基因启动子片段的 Puc57s-EGFR-P 质粒经 EcoRI 和 HindIII双酶切后可获得长度为 1103bp 和 3267bp 的两段 DNA 片段，因此在图 1-3lane2 中的 3000bp 和 1200bp 附近可见到两个明亮的条带，与 Puc57s-EGFR-P 质粒经双酶切后的片段大小一致，表明目的序列成功插入且序列大小正确。结合测序结果（见图 1-4），经全基因合成得到的 EGFR 启动子序列与预期设计的 EGFR 启动子-1667~-14bp（relative to TSS）的寡核苷酸序列完全一致，表明萤光素酶重组报告质粒构建成功。
Puc57s-EGFR-Plasmid表达质粒双酶切电泳图
【参考文献】：
期刊论文
[1]含人雌激素受体β基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及脂氧素对其转录活性的调节[J]. 张丽蓉,白剑冰,吴荣锋,林典超,黄岱薇,戴淞娟,陈琼华. 实用妇产科杂志. 2016(06)
[2]萤光素酶报告基因在病毒学研究中的应用[J]. 赵海卫,韩佩君,吕欣,尹文. 生物技术通讯. 2015(01)
[3]TNF-α 3’-UTR双荧光素酶报告基因系统的构建及丹参酮类药物筛选[J]. 韦忠红,朱智杰,刘玉萍,刘兆国,盛晓波,汪思亮,陶丽,祝娉婷,陈文星,王爱云,陆茵. 中国药理学通报. 2015(01)
[4]cAMP反应元件萤光素酶报告基因载体的构建[J]. 马晓芸,于金梅,卓仁恭,张康,郑建全. 生物技术通讯. 2014(01)
[5]荧光素酶基因的研究进展[J]. 薛秀花,黄晨西. 生物学通报. 2013(09)
[6]基于萤火虫荧光素酶ATP生物发光法灵敏度的研究进展[J]. 常超,王琨,王凌,伍金娥. 安徽农业科学. 2013(24)
[7]靶向EGFR基因的shRNA抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖的研究[J]. 林远洪,雷小林,吴永忠,高泽莉. 肿瘤防治研究. 2011(09)
[8]报告基因及其应用研究进展[J]. 杨宇,李江江,王项,邱冠周. 生命科学研究. 2011(03)
[9]DNA损伤修复基因与放射性肺损伤研究进展[J]. 周芊,杨镇洲. 重庆医学. 2010(21)
[10]基于报告基因检测的β3肾上腺素受体激动剂筛选模型的建立与应用[J]. 曾凡新,董志,傅洁民,刘晓海. 药学服务与研究. 2010(04)
博士论文
[1]基于喹唑啉结构的EGFR酪氨酸激酶抑制剂的设计与合成[D]. 覃雪梅.北京工业大学 2016
[2]以EGFR为靶点的抗肿瘤化合物的设计、合成及生物活性评价[D]. 袁继文.南京大学 2014
[3]克服耐药的非可逆EGFR抑制剂的设计、合成及生物活性筛选和类药性化合物库的构建[D]. 陈文腾.浙江大学 2013
[4]JAK-STAT6信号传导通路抑制剂的高通量筛选及作用机理的初步探讨[D]. 笪宇蓉.天津医科大学 2007
[5]表皮生长因子受体对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响[D]. 卜俊国.第一军医大学 2007
硕士论文
[1]克服耐药的非可逆EGFR抑制剂的设计合成和生物活性筛选[D]. 齐维兴.浙江大学 2015
本文编号：3538838
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：105 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
载体图谱
图 1-2 不同细胞内 EGFR 靶点表达水平，n=3.Fig1-2 The expression of EGFR in various cell lines.3.2 EGFR-promoter-Luc2 萤光素酶重组报告质粒鉴定含有 EGFR 基因启动子片段的 Puc57s-EGFR-P 质粒经 EcoRI 和 HindIII双酶切后可获得长度为 1103bp 和 3267bp 的两段 DNA 片段，因此在图 1-3lane2 中的 3000bp 和 1200bp 附近可见到两个明亮的条带，与 Puc57s-EGFR-P 质粒经双酶切后的片段大小一致，表明目的序列成功插入且序列大小正确。结合测序结果（见图 1-4），经全基因合成得到的 EGFR 启动子序列与预期设计的 EGFR 启动子-1667~-14bp（relative to TSS）的寡核苷酸序列完全一致，表明萤光素酶重组报告质粒构建成功。
Puc57s-EGFR-Plasmid表达质粒双酶切电泳图
【参考文献】：
期刊论文
[1]含人雌激素受体β基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及脂氧素对其转录活性的调节[J]. 张丽蓉,白剑冰,吴荣锋,林典超,黄岱薇,戴淞娟,陈琼华. 实用妇产科杂志. 2016(06)
[2]萤光素酶报告基因在病毒学研究中的应用[J]. 赵海卫,韩佩君,吕欣,尹文. 生物技术通讯. 2015(01)
[3]TNF-α 3’-UTR双荧光素酶报告基因系统的构建及丹参酮类药物筛选[J]. 韦忠红,朱智杰,刘玉萍,刘兆国,盛晓波,汪思亮,陶丽,祝娉婷,陈文星,王爱云,陆茵. 中国药理学通报. 2015(01)
[4]cAMP反应元件萤光素酶报告基因载体的构建[J]. 马晓芸,于金梅,卓仁恭,张康,郑建全. 生物技术通讯. 2014(01)
[5]荧光素酶基因的研究进展[J]. 薛秀花,黄晨西. 生物学通报. 2013(09)
[6]基于萤火虫荧光素酶ATP生物发光法灵敏度的研究进展[J]. 常超,王琨,王凌,伍金娥. 安徽农业科学. 2013(24)
[7]靶向EGFR基因的shRNA抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖的研究[J]. 林远洪,雷小林,吴永忠,高泽莉. 肿瘤防治研究. 2011(09)
[8]报告基因及其应用研究进展[J]. 杨宇,李江江,王项,邱冠周. 生命科学研究. 2011(03)
[9]DNA损伤修复基因与放射性肺损伤研究进展[J]. 周芊,杨镇洲. 重庆医学. 2010(21)
[10]基于报告基因检测的β3肾上腺素受体激动剂筛选模型的建立与应用[J]. 曾凡新,董志,傅洁民,刘晓海. 药学服务与研究. 2010(04)
博士论文
[1]基于喹唑啉结构的EGFR酪氨酸激酶抑制剂的设计与合成[D]. 覃雪梅.北京工业大学 2016
[2]以EGFR为靶点的抗肿瘤化合物的设计、合成及生物活性评价[D]. 袁继文.南京大学 2014
[3]克服耐药的非可逆EGFR抑制剂的设计、合成及生物活性筛选和类药性化合物库的构建[D]. 陈文腾.浙江大学 2013
[4]JAK-STAT6信号传导通路抑制剂的高通量筛选及作用机理的初步探讨[D]. 笪宇蓉.天津医科大学 2007
[5]表皮生长因子受体对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响[D]. 卜俊国.第一军医大学 2007
硕士论文
[1]克服耐药的非可逆EGFR抑制剂的设计合成和生物活性筛选[D]. 齐维兴.浙江大学 2015
本文编号：3538838
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