新型CRM1靶向抑制剂的筛选及其对结外NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖的作用

发布时间：2021-12-31 15:04

　　利用计算机辅助药物设计,筛选新型染色体区域维持因子（CRM1）共价靶向抑制剂,并探究其对结外NK/T细胞淋巴瘤（ENKTL）细胞增殖的影响。利用基于片段的药物设计方法在LFS-01母核结构的基础上设计新型CRM1抑制剂并利用ADME/T、共价对接等手段进行药物筛选得到小分子化合物LFS-829。MALDI-TOF质谱分析表明,LFS-829对CRM1具有靶向作用。用CCK-8法检测LFS-829对ENKTL细胞系SNK6及HANK-1增殖活性的影响,活细胞工作站观察药物作用下细胞形态的变化。利用免疫荧光技术分析LFS-829对CRM1核输出功能的影响。通过蛋白质免疫印迹实验、双荧光素酶报告基因实验以及酶联免疫吸附技术分析不同浓度的LFS-829作用下NF-κB信号通路的变化。借助流式细胞仪分析检测细胞凋亡,并通过蛋白质免疫印迹实验检测凋亡通路相关蛋白的表达。根据外周血单核淋巴细胞（PBMC）毒性测试、血小板毒性测试以及小鼠急性毒性实验对LFS-829进行安全性评价。结果表明,LFS-829能够与CRM1蛋白疏水活性口袋的半胱氨酸残基共价靶向结合,并选择性杀伤SNK6及HANK-1细胞,... 

【文章来源】：中国药科大学学报. 2020,51(01)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材 料
    1.1 试 剂
    1.2 仪 器
    1.3 细 胞
2 方 法
    2.1 计算机辅助药物设计
    2.2 LFS-829对CRM1作用靶点的分析
    2.3 LFS-829对ENKTL细胞增殖活性的影响
    2.4 药物作用下SNK6细胞形态的变化
    2.5 LFS-829对CRM1核输出功能的影响
    2.6 LFS-829对CRM1、NF-κB信号通路及凋亡通路相关蛋白表达的影响
    2.7 LFS-829对NF-κB转录活性的影响
    2.8 LFS-829作用下NF-κB通路下游炎症因子的表达
    2.9 细胞凋亡检测
    2.10 动物急性毒性实验
    2.11 统计学方法
3 结 果
    3.1 LFS-829通过CRM1疏水活性口袋的半胱氨酸残基与CRM1共价结合
    3.2 LFS-829选择性杀伤ENKTL细胞 具有良好的安全性
    3.3 LFS-829通过抑制CRM1蛋白活性下调NF-κB信号通路
    3.4 LFS-829可以激活细胞凋亡通路,促使SNK6细胞发生凋亡
4 讨 论



本文编号：3560473