适配体修饰的中空介孔二氧化硅共载质粒/化疗药物多功能纳米系统的构建及其抗肝癌研究
发布时间：2023-02-06 13:28
目的:癌症是世界上最具有威胁性的疾病之一,其中肝癌发生率及死亡率都排在前几位。临床药物索拉非尼(sorafenib,S)是治疗肝癌的有效药物之一,然而,依然存在水溶性差、生物利用度低等问题。因此,本研究基于CRISPR基因编辑技术,构建靶向表皮生长因子受体的重组质粒(E),合成anti-EpCAM适配体(aE)与聚酰胺-胺(PAMAM,P)的偶联物(P-aE),并制备其修饰的中空介孔二氧化硅(HMSN,HM)共载索拉非尼与质粒的多功能靶向纳米递送系统(SE@HM/P-aE),以提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性并高效地抑制肿瘤生长。方法:首先,优化HMSN合成条件制备粒径合适的羧基化HMSN纳米,通过物理方法装载索拉非尼,并通过静电作用连接适配体功能化的PAMAM(P-aE),构建S@HM/P-aE纳米递送系统。设计EGFR-sgRNA并构建质粒,采用AO/EB法和western-blot验证其生物学活性,并将其装载在S@HM/P-aE纳米中制备SE@HM/P-aE纳米药物。采用透射电镜、粒径仪、原子力显微镜、红外光谱仪等对纳米粒进行表征;高效液相法建立索拉非尼的标准曲线,并测定索拉非尼的...
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
主要符号表
第一章 引言
1.1 肝癌治疗的研究现状及进展
1.1.1 肝癌的现状
1.1.2 肝癌的诱发因素及发病机制
1.2 索拉非尼研究进展
1.2.1 索拉非尼的简介及作用机制
1.2.2 索拉非尼耐药机制
1.3 纳米靶向输送系统的研究进展
1.3.1 纳米技术的介绍
1.3.2 纳米技术在生物医药的应用
1.3.3 纳米靶向药物在癌症治疗中的应用
1.3.4 适配体在纳米药物用的应用
1.4 中空介孔二氧化硅纳米粒的研究现状
1.4.1 中空介孔二氧化硅的介绍
1.4.2 中空介孔二氧化硅的制备方法
1.4.3 中空介孔二氧化硅的应用
1.5 CRISPR/Cas9基因编辑技术及其应用
1.5.1 基因编辑技术介绍
1.5.2 基因编辑技术分类
1.5.3 CRISPR/Cas9基因编辑技术的应用
1.6 本论文的研究思路、主要研究内容及创新点
1.6.1 本论文的研究思路
1.6.2 本论文的主要研究内容
1.6.3 本论文的创新点
第二章 适配体功能化的PAMAM修饰HMSN纳米的合成及表征
2.1 实验试剂、耗材与仪器设备
2.1.1 主要试剂与药品
2.1.2 主要仪器设备与耗材
2.1.3 常用试剂的配置
2.2 实验方法
2.2.1 dSiO2纳米粒合成的条件优化
2.2.2 SiO2@HMSN纳米粒的合成
2.2.3 HMSN纳米粒的合成
2.2.4 HMSN-COOH纳米粒的合成
2.2.5 适配体功能化的树枝状分子的偶联
2.2.6 索拉非尼的载药量及其包封率的测定
2.2.7 HM/P-aE或S@HM/P-aE的合成
2.2.8 纳米粒的表征
2.3 实验结果与分析
2.3.1 HMSN的合成条件筛选与优化
2.3.2 S@HM/P-aE的合成路线
2.3.3 HMSN纳米载体及载药纳米的粒径及形貌
2.3.4 CTAC去除效果的表征
2.3.5 P-aE耦合验证及HM/P-aE多功能纳米的鉴定
2.3.6 HM/P-aE对药物sorafenib的装载量及不同条件下的释放特性
2.4 讨论
2.4.1 dSiO2的优化
2.4.2 HMSN及S@HM/P-aE纳米的合成及表征
2.5 小结
第三章 EGFR-sgRNA/Cas9质粒的构建及质粒与化疗药物共载纳米粒的制备
3.1 实验试剂、耗材与仪器设备
3.1.1 主要试剂与药品
3.1.2 主要仪器设备与耗材
3.1.3 常用试剂的配置
3.2 实验方法
3.2.1 EGFR-sgRNA的设计及验证
3.2.2 质粒的构建
3.2.3 质粒的验证
3.2.4 共载质粒纳米的合成
3.3 结果
3.3.1 重组原核表达菌种的鉴定
3.3.2 EGFR-sgRNA/Cas9质粒作用后对HeLa细胞EGFR蛋白表达的影响
3.3.3 重组质粒对细胞凋亡作用
3.3.4 SE@HM/P-aE表征
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 适配体功能化的PAMAM修饰的HMSN纳米递送系统体外靶向能力研究
4.1 实验试剂、耗材与仪器设备
4.1.1 主要试剂与药品
4.1.2 主要仪器设备与耗材
4.1.3 常用试剂的配置
4.2 实验方法
4.2.1 细胞培养
4.2.2 FITC标记的HMSN及HM/P-aE的合成
4.2.3 适配体修饰的纳米粒靶向识别能力检测
4.3 实验结果
4.3.1 FITC标记的HM/P-aE纳米靶向识别能力
4.3.2 HepG2细胞对HM/P-aE纳米的摄取量
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 适配体修饰的共载索拉非尼与质粒的靶向纳米递送系统对肝癌细胞活性的调控研究
5.1 实验试剂、耗材与仪器设备
5.1.1 主要试剂与药品
5.1.2 主要仪器设备与耗材
5.1.3 常用试剂的配置
5.2 实验方法
5.2.1 体外细胞活性检测
5.2.2 体外细胞凋亡检测
5.3 实验结果
5.3.1 纳米载体(HMSN,HM/P-aE)安全剂量的筛选
5.3.2 SE@HM/P-aE纳米药物的药效学评价
5.3.3 SE@HM/P-aE纳米药物的对肿瘤细胞凋亡的调控
5.4 讨论
5.4.1 纳米材料安全剂量筛选
5.4.2 纳米药物的细胞毒作用及细胞凋亡作用
5.4.3 纳米药物的细胞凋亡作用
5.5 小结
第六章 适配体修饰的共载索拉非尼与质粒的靶向纳米递送系统体内药效学评价及抗癌机制探讨
6.1 实验试剂、耗材与仪器设备
6.1.1 主要试剂与药品
6.1.2 主要仪器设备与耗材
6.1.3 常用试剂的配置
6.2 实验方法
6.2.1 动物饲养
6.2.2 H22细胞培养
6.2.3 小鼠移植瘤模型的建立
6.2.4 苏木精-伊红(HE)染色
6.2.5 免疫组化(IHC)
6.3 实验结果
6.3.1 纳米粒对皮下移植瘤昆明鼠体重和瘤体积的影响
6.3.2 HE染色法观察药物作用后组织病理学形态
6.3.3 SE@HM/P-aE纳米粒对肿瘤组织中EGFR表达影响
6.4 讨论
6.5 小结
结论
展望
参考文献
致谢
个人简历
本文编号：3736086
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
主要符号表
第一章 引言
1.1 肝癌治疗的研究现状及进展
1.1.1 肝癌的现状
1.1.2 肝癌的诱发因素及发病机制
1.2 索拉非尼研究进展
1.2.1 索拉非尼的简介及作用机制
1.2.2 索拉非尼耐药机制
1.3 纳米靶向输送系统的研究进展
1.3.1 纳米技术的介绍
1.3.2 纳米技术在生物医药的应用
1.3.3 纳米靶向药物在癌症治疗中的应用
1.3.4 适配体在纳米药物用的应用
1.4 中空介孔二氧化硅纳米粒的研究现状
1.4.1 中空介孔二氧化硅的介绍
1.4.2 中空介孔二氧化硅的制备方法
1.4.3 中空介孔二氧化硅的应用
1.5 CRISPR/Cas9基因编辑技术及其应用
1.5.1 基因编辑技术介绍
1.5.2 基因编辑技术分类
1.5.3 CRISPR/Cas9基因编辑技术的应用
1.6 本论文的研究思路、主要研究内容及创新点
1.6.1 本论文的研究思路
1.6.2 本论文的主要研究内容
1.6.3 本论文的创新点
第二章 适配体功能化的PAMAM修饰HMSN纳米的合成及表征
2.1 实验试剂、耗材与仪器设备
2.1.1 主要试剂与药品
2.1.2 主要仪器设备与耗材
2.1.3 常用试剂的配置
2.2 实验方法
2.2.1 dSiO2纳米粒合成的条件优化
2.2.2 SiO2@HMSN纳米粒的合成
2.2.3 HMSN纳米粒的合成
2.2.4 HMSN-COOH纳米粒的合成
2.2.5 适配体功能化的树枝状分子的偶联
2.2.6 索拉非尼的载药量及其包封率的测定
2.2.7 HM/P-aE或S@HM/P-aE的合成
2.2.8 纳米粒的表征
2.3 实验结果与分析
2.3.1 HMSN的合成条件筛选与优化
2.3.2 S@HM/P-aE的合成路线
2.3.3 HMSN纳米载体及载药纳米的粒径及形貌
2.3.4 CTAC去除效果的表征
2.3.5 P-aE耦合验证及HM/P-aE多功能纳米的鉴定
2.3.6 HM/P-aE对药物sorafenib的装载量及不同条件下的释放特性
2.4 讨论
2.4.1 dSiO2的优化
2.4.2 HMSN及S@HM/P-aE纳米的合成及表征
2.5 小结
第三章 EGFR-sgRNA/Cas9质粒的构建及质粒与化疗药物共载纳米粒的制备
3.1 实验试剂、耗材与仪器设备
3.1.1 主要试剂与药品
3.1.2 主要仪器设备与耗材
3.1.3 常用试剂的配置
3.2 实验方法
3.2.1 EGFR-sgRNA的设计及验证
3.2.2 质粒的构建
3.2.3 质粒的验证
3.2.4 共载质粒纳米的合成
3.3 结果
3.3.1 重组原核表达菌种的鉴定
3.3.2 EGFR-sgRNA/Cas9质粒作用后对HeLa细胞EGFR蛋白表达的影响
3.3.3 重组质粒对细胞凋亡作用
3.3.4 SE@HM/P-aE表征
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 适配体功能化的PAMAM修饰的HMSN纳米递送系统体外靶向能力研究
4.1 实验试剂、耗材与仪器设备
4.1.1 主要试剂与药品
4.1.2 主要仪器设备与耗材
4.1.3 常用试剂的配置
4.2 实验方法
4.2.1 细胞培养
4.2.2 FITC标记的HMSN及HM/P-aE的合成
4.2.3 适配体修饰的纳米粒靶向识别能力检测
4.3 实验结果
4.3.1 FITC标记的HM/P-aE纳米靶向识别能力
4.3.2 HepG2细胞对HM/P-aE纳米的摄取量
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 适配体修饰的共载索拉非尼与质粒的靶向纳米递送系统对肝癌细胞活性的调控研究
5.1 实验试剂、耗材与仪器设备
5.1.1 主要试剂与药品
5.1.2 主要仪器设备与耗材
5.1.3 常用试剂的配置
5.2 实验方法
5.2.1 体外细胞活性检测
5.2.2 体外细胞凋亡检测
5.3 实验结果
5.3.1 纳米载体(HMSN,HM/P-aE)安全剂量的筛选
5.3.2 SE@HM/P-aE纳米药物的药效学评价
5.3.3 SE@HM/P-aE纳米药物的对肿瘤细胞凋亡的调控
5.4 讨论
5.4.1 纳米材料安全剂量筛选
5.4.2 纳米药物的细胞毒作用及细胞凋亡作用
5.4.3 纳米药物的细胞凋亡作用
5.5 小结
第六章 适配体修饰的共载索拉非尼与质粒的靶向纳米递送系统体内药效学评价及抗癌机制探讨
6.1 实验试剂、耗材与仪器设备
6.1.1 主要试剂与药品
6.1.2 主要仪器设备与耗材
6.1.3 常用试剂的配置
6.2 实验方法
6.2.1 动物饲养
6.2.2 H22细胞培养
6.2.3 小鼠移植瘤模型的建立
6.2.4 苏木精-伊红(HE)染色
6.2.5 免疫组化(IHC)
6.3 实验结果
6.3.1 纳米粒对皮下移植瘤昆明鼠体重和瘤体积的影响
6.3.2 HE染色法观察药物作用后组织病理学形态
6.3.3 SE@HM/P-aE纳米粒对肿瘤组织中EGFR表达影响
6.4 讨论
6.5 小结
结论
展望
参考文献
致谢
个人简历
本文编号：3736086
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