达比加群通过调控YAP抑制人气道平滑肌细胞重塑的机制研究

发布时间：2023-03-19 00:23

　　背景及目的:凝血酶是凝血级联反应的核心蛋白酶,除了发挥其凝血功能以外,研究表明它还可能与哮喘的发病机制有关。我们前期的研究发现,应用于临床抗凝的直接凝血酶抑制药物达比加群,能有效减轻鸡卵清白蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠模型的气道重塑病理改变,但其对凝血酶诱导的人气道平滑肌细胞(HASMCs)的功能变化是否存在作用尚不清楚。Yes-associated protein(YAP)是Hippo信号通路的关键分子,通过影响细胞增殖和分化等来调节器官大小和组织稳态。最近的研究发现YAP在哮喘小鼠模型的气道平滑肌中高表达,但YAP是否参与凝血酶诱导的HASMCs功能变化未见报道。因此,本研究的目的是探讨达比加群对凝血酶诱导的细胞增殖、迁移和重塑相关蛋白上调的影响,明确YAP在凝血酶诱导的HASMCs功能变化中的作用,以及凝血酶调控YAP的潜在分子机制。方法:我们使用原代HASMCs作为研究模型。使用CCK-8、EdU实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;qRT-PCR、Western Blot分别检测细胞外基质蛋白Collagen Ⅰ、纤维化蛋白α-SMA、YAP下游靶蛋白CTGF和Cyclin...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
    一、实验材料
        1. 实验器材设备
        2. 主要实验试剂
        3. 主要试剂的配制
    二、实验方法
        1. 原代HASMCs培养
        2. 原代HASMCs免疫荧光鉴定
        3. 小干扰RNA转染
        4. CCK-8实验
        5. EdU实验
        6. 细胞划痕实验
        7. 细胞总RNA的提取及逆转录
        8. 实时荧光定量PCR (qRT-PCR)
        9. 细胞总蛋白的提取及浓度测定
        10. 蛋白免疫印迹(Western Blot)
        11.免疫荧光
        12. 免疫共沉淀(CoIP)
        13. 统计学分析
实验结果
    一、原代HASMCs的特点与鉴定
    二、达比加群对凝血酶诱导的HASMCs重塑的作用
    三、达比加群对凝血酶诱导的YAP激活的影响
    四、YAP对凝血酶诱导的HASMCs重塑的作用
    五、凝血酶激活YAP的机制研究
讨论
结论
参考文献
中英文缩略词表
攻读硕士期间主要科研成果
致谢



本文编号：3764162