HHQ-4在糖剥夺条件下抑制乳腺癌细胞增殖作用机制研究

发布时间：2023-03-19 20:15

　　研究背景:在缺血性实体瘤内,葡萄糖的获取和利用经常受到限制。尽管肿瘤细胞长期处于这种应激条件下,但其仍可以通过启动未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)来维持细胞内动态平衡,从而促进细胞的存活。目的:针对糖剥夺条件下乳腺癌细胞内发生的UPR活化现象,我们拟筛选抑制UPR的新型喹啉酮类衍生物,并研究其抗乳腺癌细胞增殖作用机制。方法:建立糖剥夺或2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)诱导的应激环境,研究喹啉酮类衍生物(2-hexyl-3-methyl-4(1H)-quinolinone,HHQ-4)抑制乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-231)的增殖作用。通过基因转染、基因活性剪切形式分析,蛋白磷酸化及表达水平检测等方法,进一步研究在糖剥夺条件下,HHQ-4对乳腺癌细胞内发生UPR反应关键调控蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)转录调控相关通路的影响,并进一步研究该调控作用与HHQ-4体外抗乳腺癌细胞增殖作用的相关性。结果:在糖剥夺应激条件下,HHQ-4对乳腺癌...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
1 引言
    1.1 乳腺癌发展及治疗现状
    1.2 肿瘤异质性
    1.3 糖剥夺诱导肿瘤细胞内质网应激
    1.4 葡萄糖调节蛋白GRP78 与肿瘤耐受
2 HHQ-4 在糖剥夺条件下对乳腺癌细胞增殖作用的影响
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验细胞株
        2.2.2 主要试剂
        2.2.3 一抗来源
        2.2.4 主要仪器
        2.2.5 主要试剂配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 细胞活力检测
        2.3.3 EDU掺入实验
        2.3.4 克隆形成实验
        2.3.5 细胞增殖代数分布分析
        2.3.6 凋亡检测
        2.3.7 免疫印迹检测
        2.3.8 荧光素酶报告基因分析
        2.3.9 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 HHQ-4 对乳腺癌细胞活力的影响
        2.4.2 HHQ-4 对应激诱导的乳腺癌细胞增殖作用的影响
        2.4.3 HHQ-4 对乳腺癌细胞克隆形成能力和细胞增殖代数分布的影响
        2.4.4 HHQ-4 对应激诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响
    2.5 讨论
3 HHQ-4在糖剥夺条件下抑制乳腺癌细胞增殖作用的分子机制研究
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验细胞株
        3.2.2 主要试剂
        3.2.3 一抗来源
        3.2.4 主要仪器
        3.2.5 主要试剂配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养
        3.3.2克隆形成实验
        3.3.3 胞浆和胞核蛋白提取
        3.3.4 免疫印迹检测
        3.3.5 XBP-1活性形式剪切分析
        3.3.6 RNA逆转录和实时荧光定量PCR(RT-PCR)分析
        3.3.7 表达质粒转染
        3.3.8 统计学分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 HHQ-4 对应激诱导的乳腺癌细胞葡萄糖调节蛋白影响的时效关系
        3.4.2 HHQ-4 对应激诱导的乳腺癌细胞葡萄糖调节蛋白影响的量效关系
        3.4.3 HHQ-4 抑制乳腺癌细胞增殖依赖于GRP78 蛋白表达的下调
        3.4.4 无糖应激环境对PERK/eIF2α/ATF4 通路的影响
        3.4.5 HHQ-4 对无糖诱导的PERK/eIF2α/ATF4 通路相关蛋白表达的影响
        3.4.6 HHQ-4 抑制GRP78 表达和细胞增殖是部分通过阻断PERK/eIF2α/ATF4 信号通路来实现
        3.4.7 HHQ-4 对无糖应激诱导的ATF6 蛋白表达的影响
        3.4.8 HHQ-4 抑制GRP78 表达和细胞增殖是部分通过阻断ATF6 信号通路
        3.4.9 无糖应激环境对IRE1/XBP1 通路的影响
        3.4.10 HHQ-4 对无糖应激诱导的IRE1/XBP1 信号通路的影响
        3.4.11 HHQ-4 抑制GRP78 表达和细胞增殖是部分通过阻断IRE1/XBP1 信号通路来实现
    3.5 讨论
4 全文总结
致谢
参考文献
附图1
附图2
附图3
个人简历、在校期间发表的学术论文及取得的研究成果



本文编号：3765895