Trk小分子抑制剂GZD2202体内外抗神经母细胞瘤作用及其机制研究
发布时间：2023-04-22 17:08
背景及目的:原肌球蛋白受体激酶(Trks)是一类神经营养因子受体,包括TrkA,Trk B和TrkC三个亚型,神经营养因子(Neurotrophins)与Trk的结合能够诱导受体的二聚化和磷酸化,并激活下游PI3K/Akt/mTOR、PLCγ和Ras/Raf/MEK/ERK信号级联通路,从而调控着肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭、迁移、血管生成及耐药性。本论文主要开展Trk小分子抑制剂GZD2202的体内外抗神经母细胞瘤的作用及机制研究。方法:本论文首先使用Z’-LYTETM激酶活性测试方法对GZD2202进行体外激酶活性测试,然后采用质粒转染法对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y进行pRP-TrkB质粒转染,构建并得到了TrkB高表达的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y-Trk B,再使用CCK-8考察GZD2202体外抗BDNF诱导的神经母细胞瘤细胞增殖活性。Wound healing划痕实验及Transwell侵袭迁移实验考察GZD2202对BDNF诱导的神经母细胞瘤细胞的侵袭和迁移的影响,Western Blot法研究GZD2202体外抗增殖及抗转移的机制。在此基础上进...
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文对照及缩写
第一章 绪论
1.1 神经母细胞瘤
1.1.1 神经母细胞瘤概况
1.1.2 神经母细胞瘤的靶向治疗靶标
1.2 Trk
1.2.1 Trk概况
1.2.2 Trk下游信号通路
1.2.3 Trk与肿瘤
1.3 Trk可作为神经母细胞瘤的治疗靶标
1.4 Trk抑制剂研究现状
1.5 立题依据
第二章 SH-SY5Y-TrkB稳定株的构建
2.1 实验材料
2.1.1 主要实验耗材和仪器
2.1.2 主要实验试剂
2.1.3 细胞系
2.1.4 主要实验试剂和溶液的配制
2.2 实验方法
2.2.1 因子储备液的配制与保存
2.2.2 细胞培养
2.2.3 大肠杆菌的培养
2.2.4 大肠杆菌质粒的提取
2.2.5 嘌呤霉素最佳筛选浓度的确定
2.2.6 pRP-TrkB质粒转染
2.2.7 稳定株的鉴定
2.2.8 WesternBlot法检测BDNF对TrkB及其下游信号通路的作用
2.2.9 CCK-8法检测BDNF对SH-SY5Y及SH-SY5Y-TrkB细胞增殖的影响
2.2.10 克隆形成实验检测BDNF对SH-SY5Y及SH-SY5Y-TrkB细胞克隆形成的影响
2.2.11 Transwell实验检测BDNF对SH-SY5Y及SH-SY5Y-TrkB细胞迁移能力的影响
2.2.12 WesternBlot法检测BDNF对侵袭迁移相关蛋白表达的影响
2.3 实验结果与讨论
2.3.1 TrkB在SH-SY5Y-TrkB细胞中mRNA水平高表达
2.3.2 TrkB在SH-SY5Y-TrkB细胞中蛋白水平高表达
2.3.3 BDNF激活TrkB及其下游信号通路
2.3.4 TrkB的激活促进神经母细胞瘤细胞增殖
2.3.5 TrkB的激活促进神经母细胞瘤细胞克隆形成
2.3.6 TrkB的激活促进神经母细胞瘤细胞侵袭和迁移
2.3.7 BDNF上调MMP2/MMP9的表达
2.4 本章小结
第三章 GZD2202体外活性研究
3.1 实验材料
3.1.1 主要实验仪器
3.1.2 主要实验试剂
3.1.3 细胞系
3.1.4 药物
3.2 实验方法
3.2.1 化合物及因子储备液的配制与保存
3.2.2 细胞培养
3.2.3 激酶活性测试(Z’-LYTETMkinaseassay)
3.2.4 CCK-8法检测受试化合物抗增殖活性
3.2.5 Wound healing实验检测GZD2202对BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞迁移能力的影响
3.2.6 Transwell实验检测GZD2202对BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞侵袭能力的影响
3.3 实验结果与讨论
3.3.1 GZD2202是一个新骨架Trk抑制剂
3.3.2 GZD2202抑制BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞增殖
3.3.3 GZD2202抑制BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞克隆形成
3.3.4 GZD2202抑制BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞的侵袭和迁移
3.4 本章小结
第四章 GZD2202体外抗肿瘤作用机制研究
4.1 实验材料
4.1.1 主要实验仪器
4.1.2 主要实验试剂
4.1.3 抗体
4.1.4 细胞系
4.1.5 药物
4.2 实验方法
4.2.1 WesternBlot实验检测GZD2202对TrkB信号通路相关蛋白表达的影响
4.2.2 WesternBlot实验检测GZD2202对SH-SY5Y-TrkB细胞中迁移侵袭相关蛋白表达的影响
4.3 实验结果与讨论
4.3.1 GZD2202抑制BDNF诱导的TrkB及其下游信号通路的活化
4.3.2 GZD2202抑制BDNF诱导的MMP2/MMP9的表达
4.4 本章小结
第五章 GZD2202体内抗SH-SY5Y-TrkB小鼠移植瘤活性及其机制研究
5.1 实验材料
5.1.1 动物
5.1.2 药物
5.1.3 细胞系
5.1.4 主要仪器、实验器材及实验试剂
5.2 实验方法
5.2.1 D2202的准备
5.2.2 SH-SY5Y-TrkB小鼠体内移植瘤模型的建立
5.2.3 动物分组及给药
5.2.4 TUNEL法观察GZD2202对各荷瘤鼠肿瘤组织细胞凋亡的影响
5.3 实验结果与讨论
5.3.1 GZD2202抑制SH-SY5Y-TrkB小鼠体内移植瘤的生长
5.3.2 GZD2202促进肿瘤组织细胞发生凋亡
5.4 本章小结
第六章 全文总结
6.1 主要结论
6.2 创新之处
6.3 展望
参考文献
在校期间撰写及发表的论文
致谢
本文编号：3798061
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文对照及缩写
第一章 绪论
1.1 神经母细胞瘤
1.1.1 神经母细胞瘤概况
1.1.2 神经母细胞瘤的靶向治疗靶标
1.2 Trk
1.2.1 Trk概况
1.2.2 Trk下游信号通路
1.2.3 Trk与肿瘤
1.3 Trk可作为神经母细胞瘤的治疗靶标
1.4 Trk抑制剂研究现状
1.5 立题依据
第二章 SH-SY5Y-TrkB稳定株的构建
2.1 实验材料
2.1.1 主要实验耗材和仪器
2.1.2 主要实验试剂
2.1.3 细胞系
2.1.4 主要实验试剂和溶液的配制
2.2 实验方法
2.2.1 因子储备液的配制与保存
2.2.2 细胞培养
2.2.3 大肠杆菌的培养
2.2.4 大肠杆菌质粒的提取
2.2.5 嘌呤霉素最佳筛选浓度的确定
2.2.6 pRP-TrkB质粒转染
2.2.7 稳定株的鉴定
2.2.8 WesternBlot法检测BDNF对TrkB及其下游信号通路的作用
2.2.9 CCK-8法检测BDNF对SH-SY5Y及SH-SY5Y-TrkB细胞增殖的影响
2.2.10 克隆形成实验检测BDNF对SH-SY5Y及SH-SY5Y-TrkB细胞克隆形成的影响
2.2.11 Transwell实验检测BDNF对SH-SY5Y及SH-SY5Y-TrkB细胞迁移能力的影响
2.2.12 WesternBlot法检测BDNF对侵袭迁移相关蛋白表达的影响
2.3 实验结果与讨论
2.3.1 TrkB在SH-SY5Y-TrkB细胞中mRNA水平高表达
2.3.2 TrkB在SH-SY5Y-TrkB细胞中蛋白水平高表达
2.3.3 BDNF激活TrkB及其下游信号通路
2.3.4 TrkB的激活促进神经母细胞瘤细胞增殖
2.3.5 TrkB的激活促进神经母细胞瘤细胞克隆形成
2.3.6 TrkB的激活促进神经母细胞瘤细胞侵袭和迁移
2.3.7 BDNF上调MMP2/MMP9的表达
2.4 本章小结
第三章 GZD2202体外活性研究
3.1 实验材料
3.1.1 主要实验仪器
3.1.2 主要实验试剂
3.1.3 细胞系
3.1.4 药物
3.2 实验方法
3.2.1 化合物及因子储备液的配制与保存
3.2.2 细胞培养
3.2.3 激酶活性测试(Z’-LYTETMkinaseassay)
3.2.4 CCK-8法检测受试化合物抗增殖活性
3.2.5 Wound healing实验检测GZD2202对BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞迁移能力的影响
3.2.6 Transwell实验检测GZD2202对BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞侵袭能力的影响
3.3 实验结果与讨论
3.3.1 GZD2202是一个新骨架Trk抑制剂
3.3.2 GZD2202抑制BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞增殖
3.3.3 GZD2202抑制BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞克隆形成
3.3.4 GZD2202抑制BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞的侵袭和迁移
3.4 本章小结
第四章 GZD2202体外抗肿瘤作用机制研究
4.1 实验材料
4.1.1 主要实验仪器
4.1.2 主要实验试剂
4.1.3 抗体
4.1.4 细胞系
4.1.5 药物
4.2 实验方法
4.2.1 WesternBlot实验检测GZD2202对TrkB信号通路相关蛋白表达的影响
4.2.2 WesternBlot实验检测GZD2202对SH-SY5Y-TrkB细胞中迁移侵袭相关蛋白表达的影响
4.3 实验结果与讨论
4.3.1 GZD2202抑制BDNF诱导的TrkB及其下游信号通路的活化
4.3.2 GZD2202抑制BDNF诱导的MMP2/MMP9的表达
4.4 本章小结
第五章 GZD2202体内抗SH-SY5Y-TrkB小鼠移植瘤活性及其机制研究
5.1 实验材料
5.1.1 动物
5.1.2 药物
5.1.3 细胞系
5.1.4 主要仪器、实验器材及实验试剂
5.2 实验方法
5.2.1 D2202的准备
5.2.2 SH-SY5Y-TrkB小鼠体内移植瘤模型的建立
5.2.3 动物分组及给药
5.2.4 TUNEL法观察GZD2202对各荷瘤鼠肿瘤组织细胞凋亡的影响
5.3 实验结果与讨论
5.3.1 GZD2202抑制SH-SY5Y-TrkB小鼠体内移植瘤的生长
5.3.2 GZD2202促进肿瘤组织细胞发生凋亡
5.4 本章小结
第六章 全文总结
6.1 主要结论
6.2 创新之处
6.3 展望
参考文献
在校期间撰写及发表的论文
致谢
本文编号：3798061
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