靶向纳米光敏剂的制备及在肿瘤光动力治疗中的应用

发布时间：2023-05-04 01:14

　　目的:1.合成两类不同粒径的新型靶向纳米光敏剂scFv-Z@FRT及HANP/Ce6并进行表征,分别评估其稳定性、水溶性及ROS生成情况,为二者的进一步研究与应用提供依据。2.评价scFv-Z@FRT与不同肿瘤组织的结合能力。探讨scFv-Z@FRT介导的PDT在裸鼠双侧4T1肿瘤模型中CAF及胶原的清除情况,评估PDT后不同粒径的纳米颗粒在肿瘤中的累积和渗透效应。3.探讨HANP/Ce6的细胞毒性、靶向性及生物分布情况。评价HANP/Ce6介导的PDT对HT29荷瘤鼠的疗效,并探讨¹⁸F-FDG PET在其疗效评估中的应用价值。方法:1.采用聚合酶链反应(PCR)从cDNA扩增FRT DNA区段,将其连接到pRSF质粒上,而后转化到大肠杆菌XL1-Blue感受态细胞中。将筛选得到的pRSF/FRT质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导铁蛋白产生后进行纯化。为获得抗FAP scFv,我们将相应DNA编码序列片段插入pOPE101质粒中,并转化到具有氨苄青霉素抗性的大肠杆菌JM109中。将PelB信号肽序列插入scFv的N端,诱导抗FAP scFv产生后进行纯...

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
第1章 绪论
第2章 文献综述
    2.1 引言
    2.2 光动力治疗概述
    2.3 光动力治疗的基本原理
    2.4 光动力治疗的抗肿瘤机制
    2.5 光动力治疗的必需因素
    2.6 光敏剂在光动力治疗中的研究进展
        2.6.1 第一代光敏剂
        2.6.2 第二代光敏剂
        2.6.3 第三代光敏剂
    2.7 纳米技术在抗肿瘤光敏剂中的应用
        2.7.1 自身具有光学特性的纳米颗粒
        2.7.2 光敏剂纳米载体
        2.7.3 增加组织穿透深度
        2.7.4 多功能纳米药物
第3章 scFv-Z@FRT的制备与表征
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验试剂
        3.1.2 实验仪器及设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 铁蛋白的制备
        3.2.2 抗FAP scFv的制备
        3.2.3 scFv-Z@FRT的合成、纯化与表征
        3.2.4 水溶性及稳定性研究
        3.2.5 单线态氧生成情况研究
    3.3 结果
        3.3.1 scFv-Z@FRT的制备与表征
        3.3.2 水溶性及稳定性
        3.3.3 单线态氧生成情况
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 scFv-Z@FRT与肿瘤结合能力及PDT效果评估
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验试剂
        4.1.2 实验仪器及设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 scFv-Z@FRT与不同肿瘤结合能力的研究
        4.2.2 荷瘤鼠肿瘤模型的建立
        4.2.3 CAF及胶原清除情况研究
        4.2.4 大分子/纳米颗粒瘤内积聚情况研究
        4.2.5 小鼠肿瘤免疫荧光染色分析
    4.3 结果
        4.3.1 scFv-Z@FRT与不同肿瘤结合能力的研究
        4.3.2 CAF及胶原清除情况
        4.3.3 大分子/纳米颗粒瘤内积聚情况
        4.3.4 小鼠肿瘤免疫荧光染色分析
    4.4 讨论
    4.5 小结
第5章 HANP/Ce6 的制备与表征
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验试剂
        5.1.2 实验仪器及设备
    5.2 实验方法
        5.2.1 HANP/Ce6 的制备
        5.2.2 Ce6 载量研究
        5.2.3 HANP/Ce6 的表征
        5.2.4 水溶性及稳定性研究
        5.2.5 Ce6 释放及ROS生成情况研究
    5.3 结果
        5.3.1 Ce6 载量研究
        5.3.2 HANP/Ce6 的表征
        5.3.3 水溶性及稳定性
        5.3.4 Ce6 释放及ROS生成情况
    5.4 讨论
    5.5 小结
第6章 HANP/Ce6 的生物学效应分析及PDT疗效评估
    6.1 实验材料
        6.1.1 实验试剂
        6.1.2 实验仪器及设备
    6.2 实验方法
        6.2.1 HANP/Ce6 靶向性研究
        6.2.2 细胞内ROS生成量研究
        6.2.3 细胞毒性研究
        6.2.4 荷瘤裸鼠肿瘤模型的建立
        6.2.5 HANP/Ce6 体内分布情况
        6.2.6 PDT疗效评估
        6.2.7 ¹⁸F-FDG PET疗效监测
        6.2.8 组织学分析
        6.2.9 统计学分析
    6.3 结果
        6.3.1 HANP/Ce6 靶向性
        6.3.2 细胞内ROS生成量研究
        6.3.3 细胞毒性研究
        6.3.4 HANP/Ce6 体内分布情况
        6.3.5 PDT疗效评估
        6.3.6 ¹⁸F-FDG PET疗效监测
        6.3.7 组织学分析
    6.4 讨论
    6.5 小结
第7章 结论
创新点
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3807651