亚胺吩嗪类药物的耐药机制和作用机制探讨及含吡法齐明的组合方案筛选

发布时间：2023-06-04 18:26

　　氯法齐明(clofazimine,CFZ)在抗结核治疗中发挥越来越重要的作用,其结构改造物吡法齐明(TBI-166)近年被成功合成,前期评价结果显示TBI-166较CFZ活性更强而不良反应更弱,有着良好的应用前景。目前,TBI-166已在国内进入Ⅰ期临床研究,需要更详细的体内外研究数据作为Ⅱ期临床研究的依据和参考。此外,关于TBI-166的作用机制和耐药机制的研究也尚未开展。本研究利用高通量全基因组DNA重测序技术及DIA蛋白质组学技术对CFZ和TBI-166的耐药机制和作用机制进行研究,并在小鼠结核病模型中对TBI-166联合用药及化疗方案中的应用进行了探索。第一部分,我们对CFZ和TBI-166的耐药机制进行了初步研究。通过对200株耐多药结核分枝杆菌临床分离株进行筛选,发现TBI-166对超过95%的耐多药结核分枝杆菌临床分离株均有较好的抑菌作用,且其活性较CFZ的体外活性更高而耐药率低于CFZ,但TBI-166可能容易出现高度耐药的现象,并且TBI-166 与 CFZ 和 BDQ 之间可能存在交叉耐药。通过对筛选获得的 13 株 CFZ 耐药菌株和9株TBI-166耐药菌株进行...

【文章页数】：158 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
引言
第一部分 亚胺吩嗪类药物的耐药性及耐药机制的研究
    实验材料
        1 菌株
        2 仪器
        3 实验用药物
        4 实验用试剂
        5 实验用试剂盒
    实验方法
        1 药物储备液的制备
        2 培养基的配制
        3 MABA法测定结核分枝杆菌MIC
        4 CFZ或TBI-166耐药菌株的筛选
        5 全基因组DNA的提取
        6 全基因组DNA测序
        7 全基因组测序分析结果筛选
        8 系统进化树的构建
    实验结果
        1 TBI-166对结核分枝杆菌H37Rv标准株的MIC测定
        2 临床分离菌株对CFZ及TBI-166的敏感性
        3 TBI-166及CFZ、BDQ的交叉耐药性
        4 耐药菌株与对照组敏感菌株的流行病学特征
        5 差异基因的筛选
        6 差异基因的生物信息学分析
        7 Rv0678基因突变与CFZ、TBI-166和BDQ耐药相关性
        8 Rv1453基因突变与CFZ耐药相关性
        9 其他基因突变与CFZ耐药相关性
    讨论
第二部分 亚胺吩嗪类药物的作用机制的研究
    实验材料
        1 实验用菌株
        2 实验仪器
        3 实验用药物
        4 实验用其他试剂
        5 实验用试剂盒
    实验方法
        1 7H9培养基的配制
        2 结核分枝杆菌的培养和传代
        3 结核菌活性氧含量检测
        4 结核菌过氧化氢酶活性测定
        5 用于蛋白测序菌株的药物处理
        6 结核菌总蛋白的提取
        7 结核菌总蛋白的定量分析
        8 蛋白测序数据的筛选和分析
    实验结果
        1 结核分枝杆菌的活性氧检测
        2 结核分枝杆菌的过氧化氢酶活性测定
        3 样本总蛋白的提取和质检
        4 DDA和DIA定量检测
        5 差异蛋白筛选
        6 生物信息学分析
    讨论
第三部分 含吡法齐明的药物组合在小鼠模型中的作用评价
    实验材料
        1 实验用菌株
        2 实验用动物
        3 实验仪器
        4 实验用药物
        5 实验用其他试剂
    实验方法
        1 培养基的配制
        2 TBI-166的体外相互作用评估
        3 小鼠气溶胶感染
        4 小鼠感染模型的建立
        5 小鼠灌胃给药
        6 化疗方案的设置
        7 方案疗效的评估
        8 病理组织诊断
        9 统计分析
    实验结果
        1 TBI-166与其他抗结核药物的体外相互作用评估
        2 小鼠组织色素沉着及肺部大体病变情况情况
        3 TBI-166在BALB/c小鼠模型上的体内相互作用评价
        4 TBI-166在C3HeB/FeJNju小鼠模型上的体内相互作用评价
        5 灭菌活性的评价
        6 小鼠脾脏和肺组织的病理改变
    讨论
小结
参考文献
综述 亚胺吩嗪类药物抗结核作用研究进展
    参考文献
攻读学位期间发表论文情况
致谢
个人简历



本文编号：3830792