SB-706375抗心肌缺血性损伤作用及其阻断UTR-RhoA/ROCK-RIP3信号通路的实验研究

发布时间：2023-08-15 19:03

　　研究背景随着人口的增长和老龄化,中国冠心病事件的发生和死亡的绝对数量在急剧增加。冠心病最严重的后果是急性心肌梗死,心肌梗死后溶栓、经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)和冠状动脉旁路手术(Coronary Artery Bypass Grafting,CABG)是恢复再灌注血流的主要治疗方法,而再灌注过程会引起心脏结构和功能的损伤从而导致病情加重,目前尚无有效的治疗方法。因此,保护心肌细胞免受缺血再灌注损伤,同时阐明损伤机制具有重要意义。尾加压素II(urotensinII,UII)是存在于人类以及不同哺乳动物物种中的生长激素样神经环肽,UII通过激活UT受体(urotensinII receptor,UTR)在多种心血管疾病病理生理发展中起关键作用。因此,人们不断进行临床前药物试验研究,希望能够发现高效能及高选择性的UTR阻断剂药物。SB-706375做为一种哺乳动物UTR阻断剂,具有高效性、可逆性和高选择性,且无内在活性。但到目前为止,关于SB-706375抗心肌缺血再灌注损伤的作用及相关机制尚未见报道,所以本课题选用S...

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【学位级别】：博士

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中文摘要
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1.前言
2.材料和方法
    2.1 实验动物
        2.1.1 鉴定方法
        2.1.2 鉴定结果
    2.2 药品与试剂
    2.3 仪器与设备
3.试验方法及研究内容
    3.1 小鼠心肌缺血模型
        3.1.1 实验分组
        3.1.2 实验步骤
        3.1.3 心肌组织HE染色
        3.1.4 心肌组织蛋白提取
        3.1.5 心肌组织蛋白定量检测
        3.1.6 心肌组织中ROCK1,ROCK2和RIP3蛋白的表达的检测
    3.2 离体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型
        3.2.1 配制Krebs–Henseleit(K-H)缓冲液
        3.2.2 大鼠左心室球囊导管的制作
        3.2.3 灌流系统的矫零
        3.2.4 离体大鼠心脏的制备
        3.2.5 大鼠Langendorff模型的建立
        3.2.6 实验分组及给药
        3.2.7 血流动力学指标监测
        3.2.8 冠脉流量的测定
        3.2.9 灌流液中cTnI含量和LDH、CK-MB活性的测定
        3.2.10 大鼠心肌组织中B淋巴细胞瘤-2 基因简称bcl-2（B-cell lymphoma-2）Bcl-2及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein,BAX)Bax的测定（免疫组化方法）
        3.2.11 心肌组织中RhoA活性测定
        3.2.12 大鼠心肌组织中UTR,ROCK1,ROCK2,RIP3和CaMKⅡ蛋白的表达的检测
        3.2.13 心肌组织中ROCK和 RIP3 蛋白免疫共沉淀方法
    3.3 配对实验设计
        3.3.1 实验动物
        3.3.2 离体心脏模型
        3.3.3 心功能`指标的测定
        3.3.4 灌流液中cTnI含量和LDH,CK-MB活性的测定
        3.3.5 实验分组及给药
    3.4 统计学处理
4.实验结果
    4.1 SB-706375 对小鼠心肌缺血性损伤的保护作用
        4.1.1 SB-706375 对小鼠缺血性心肌损伤后心电图ST段的影响
        4.1.2 SB-706375 对小鼠缺血性心肌损伤后血清TnI含量及CK-MB,LDH的活性的影响
        4.1.3 SB-706375 对小鼠缺血心肌组织病理学的影响
    4.2 SB-706375 保护小鼠心肌缺血性损伤的作用机制
        4.2.1 SB-706375对小鼠缺血性心肌ROCK1,ROCK2 蛋白表达的影响
        4.2.2 SB-706375 对小鼠缺血心肌RIP3 蛋白表达的影响
    4.3 CSE KO对 SB-706375 保护小鼠缺血心肌损伤的影响
        4.3.1 CSE产生的H2S对 SB-706375 抑制小鼠缺血性心肌损伤后心电图ST段变化的影响
        4.3.2 CSE产生的H2S对 SB-706375 抑制小鼠缺血性心肌损伤后心肌酶学指标的影响
        4.3.3 CSE产生的H2S对 SB-706375诱导小鼠缺血心肌ROCK1,ROCK2 蛋白表达的影响
        4.3.4 CSE产生的H2S对 SB-706375 诱导小鼠缺血心肌RIP3蛋白表达的影响
    4.4 SB-706375 对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响
        4.4.1 大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型的建立
        4.4.2 SB-706375 对大鼠离体心肌I/R损伤血流动力学指标和冠脉流量的影响
        4.4.3 SB-706375 对大鼠离体心肌组织I/R损伤后病理学的影响
        4.4.4 SB-706375 对大鼠离体心肌I/R灌流液中CK-MB,LDH的活性和cTnI含量的影响
        4.4.5 SB-706375 对大鼠离体心肌I/R后心肌组织中UTR蛋白表达的影响
        4.4.6 SB-706375 对大鼠离体心肌I/R后心肌组织中RhoA活性的影响
        4.4.7 SB-706375 对大鼠离体心肌I/R后心肌组织中ROCK1 和ROCK2 蛋白表达的影响
        4.4.8 SB-706375 对大鼠离体心肌I/R后心肌组织中RIP3 蛋白表达的影响
        4.4.9 SB-706375 对大鼠离体心肌I/R后心肌组织中CaMKII蛋白表达的影响
        4.4.10 SB-706375 对大鼠离体心肌I/R后心肌组织中Bcl-2 表达的影响
        4.4.11 SB-706375 对大鼠离体心肌I/R后心肌组织中Bax表达的影响
    4.5 阻断ROCK对 SB-706375 改善大鼠离体心肌I/R损伤的影响
        4.5.1 阻断ROCK对 SB-706375 改善大鼠离体心肌I/R损伤后血流动力学指标的影响
        4.5.2 阻断ROCK对 SB-706375 改善大鼠离体心肌I/R损伤后灌流液中CK-MB,LDH活性和cTnI含量的影响
        4.5.3 阻断ROCK对 SB-706375 改善大鼠离体心肌I/R损伤后RhoA活性的影响
        4.5.4 大鼠离体心肌组织中RIP3与ROCKs(ROCK1,ROCK2)蛋白之间的相互作用
5.讨论
    5.1 SB-706375 对小鼠心肌缺血性损伤的保护作用
    5.2 SB-706375 通过抑制ROCK/RIP3 通路发挥小鼠心肌缺血性损伤的保护作用
    5.3 CSE产生的H2S参与小鼠缺血性心肌损伤的ROCK/RIP3 通路
    5.4 SB-706375 对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的保护作用
    5.5 SB-706375 抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制
6.结论
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3842095