DRAM1改善鱼藤酮神经毒性作用及其分子机制

发布时间：2024-05-16 04:34

　　目的:阐明DNA损伤调节自噬相关蛋白1(DNA damage-regulated autophagy modulator1,DRAM1)在中脑多巴胺能细胞系MES 23.5的过表达对鱼藤酮毒性损伤的保护作用,阐明DRAM1在过表达时对多巴胺能细胞内自噬的影响,进而揭示DRAM1在鱼藤酮PD模型中影响α-突触核蛋白(α-synuclein)蓄积以及多巴胺能神经元生存的分子机制。方法:通过对细胞存活率的检测选择合适的鱼藤酮浓度和作用时间,构建鱼藤酮所致帕金森细胞模型。Western blot法检测α-突触核蛋白和DRAM1的蛋白水平,RT-PCR法检测α-synuclein和DRAM1的m RNA水平。免疫细胞化学实验观察鱼藤酮对MES23.5细胞内α-突触核蛋白聚集的影响。构建鱼藤酮所致帕金森大鼠模型,检测模型大鼠中脑部位α-突触核蛋白和DRAM1的蛋白水平。构建DRAM1过表达模型后使用鱼藤酮,观察细胞存活率的降低情况以及细胞形态学变化。构建DRAM1干扰模型后使用鱼藤酮,观察细胞存活率的降低情况。鱼藤酮作用MES23.5,Western blot法检测p62和LC3 II蛋白水平变化...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1.1鱼藤酮通过不同的途径损伤神经细胞[4]

图1.1鱼藤酮通过不同的途径损伤神经细胞[4]自噬过程及其分子调控噬是40多年前学者在电镜下观察到的一种细胞结构,然而,直到最近几渐认识到自噬的重要功能,尤其是2005年Science杂志将细胞自噬评为技热点研究之首,自噬相关研究得以迅速进展。自噬通过降解细胞内小....

图1.2自噬障碍与帕金森疾病的关系[56]

54图1.2自噬障碍与帕金森疾病的关系[56]α突触核蛋白在生理调节下会经由自噬溶酶体途径（autophagy-lysosomepathw泛素蛋白酶体途径（ubiquitin-proteasomesystem，UPS）降解。实验证明，纯化触核蛋白与分离的溶酶体共培养时，能够....

图1.3TP53下游基因DRAM1参与自噬与凋亡过程[61]

TP53下游基因DRAM1参与自噬与凋亡过路中的作用信号通路中的作用学的预测和免疫荧光研究，认为Dp53和DRAM1可以够诱导自噬体。Crighton还发现DRAM1作为一种体通常是在自噬的后期阶段发挥降解给其他启动自噬的蛋白质，也可能是[64,65]。目前，....

图1.4DRAM1增强溶酶体的酸化[64]

活需要一个合适的pH环境，目前广泛认为质子泵的激活能够维持溶酶体内较低的pH环境，而ATP依赖的质子泵能帮组将氢质子转移入细胞器。所以氢质子泵对于维持细胞器内pH环境的稳定有重要意义。溶酶体膜上嵌有ATP依赖的质子运输泵，它能将H+泵入溶酶体内，使得溶酶体内的....

本文编号：3974698