NADPH氧化酶NOX4抑制剂调节肝癌相关成纤维细胞的形成和机制研究

发布时间：2025-01-01 02:07

　　 目的:研究NADPH氧化酶（NOX4）抑制剂GLX351322抑制肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）形成的作用和机制。方法:小鼠成纤维细胞NIH3T3和肝癌H22共培养,5μmol/L(IC₅₀)的GLX351322进行NIH3T3预处理。CCK-8法检测成纤维细胞的活力,PI染色后流式细胞术检测细胞周期的改变,免疫荧光染色检测CAFs标志物α-SMA和FAP的表达,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测CAFs标志物α-SMA、Desmin、FAP、TSP-1、FSP、CyclinD的表达水平以及TGF-β1、Smad1的表达。H22构建荷瘤小鼠模型后,GLX351322处理,免疫组织化学染色检测肿瘤组织中α-SMA的表达情况以及CAFs标志物的表达水平。结果:GLX351322预处理后可以抑制NIH3T3的增殖,细胞活力下调,周期改变。同时可以下调CAFs标志物α-SMA、Desmin、FAP、TSP-1、FSP、CyclinD的表达,且TGF-β信号受到抑制。而在荷瘤小鼠模型中,GLX351322也可以显著抑制α-SMA的表达以及CAFs标志物的表达水平...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料和细胞
    1.2 细胞培养及实验分组
    1.3 成纤维细胞转化CAFs的检测指标
        1.3.1 CCK-8法检测细胞活力
        1.3.2 PI染色-流式细胞术检测细胞周期的改变
        1.3.3 细胞免疫荧光染色检测α-SMA和FAP的表达
        1.3.4 Western blot法检测CAF标志蛋白的表达
    1.4 荷瘤小鼠模型的构建及GLX351322的干预
    1.5 小鼠肿瘤组织免疫组织化学染色
    1.6 统计学方法
2 结果
    2.1 GLX351322对于NHI3T3细胞活力及周期改变的影响
    2.2 GLX351322对于CAFs标志蛋白表达的影响
    2.3 CAFs标志物α-SMA和FAP的免疫荧光染色结果
    2.4 小鼠肿瘤组织中α-SMA的免疫组织化学染色结果
    2.5 小鼠肿瘤组织中CAFs标志物的表达结果
3 讨论



本文编号：4021887