apoA-I半胱氨酸突变体与apoA-V协同抗动脉粥样硬化作用的体外研究

发布时间：2025-01-15 19:08

　　目的:构建含有不同比例apoA-Iwt半胱氨酸突变体及apoA-V的重组脂质体,以研究apoA-I半胱氨酸突变体与apoA-V协同体外的抗动脉粥样硬化作用。方法:1.从温度、IPTG诱导浓度、IPTG诱导时间三个方面优化apoA-I大肠杆菌原核培养系统;2.将大肠杆菌原核系统培养纯化的重组高密度脂蛋白(recombinant high-density lipoprotein,rHDL):野生型载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I wild type,apoA-Iwt)、apoA-Iwt天然半胱氨酸突变体A-I Milano(apolipoprotein A-I Milano,apoA-IM)以及由apoA-Iwt构建的半胱氨酸突变体A-I(N74C)(apolipoprotein A-I(N74C),apoAI(N74C)),按1:0、100:1、1:1、1:100及0:1的实验比例加入载脂蛋白A-V(apolipoprotein A-V,apoA-V),按1:3.35的质量比加入二棕榈酰磷脂酰胆碱(1,2-dihexadecanoyl-rac-glycero-3-pho...

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【部分图文】：

图1.1不同温度apoA-Iwt蛋白表达的SDS-PAGE条带1：低分子量蛋白Marker；2-5：不同温度（25℃，28℃，32℃，37℃）诱导3h

图1.1不同温度apoA-Iwt蛋白表达的SDS-PAGE条带蛋白Marker；2-5：不同温度（25℃，28℃，32℃，37℃浓度对apoA-Iwt表达的影响同终浓度的IPTG分别为0.5mmol/L、1.0mmol/L、浓度不同，诱导的apoA-Iw....

图2.1apoA-Iwt经镍柱纯化后各组分的SDS-PAGE（12%）凝胶结果

结果wt及其半胱氨酸突变体的原核表达与纯化原核表达系统表达的蛋白经镍亲和层析柱纯化后，用SDS-PA泳鉴定，考马斯亮蓝染色后显示有明显的蛋白条带，与目的预期相同。图2.1为镍柱纯化后各组分buffer所洗脱下的蛋白）凝胶结果，第2条带为大体积的未纯化蛋白条带，可见....

图2.2apoA-Iwt及其半胱氨酸突变体的SDS-PAGE（12%）凝胶结果

oA-Iwt及其半胱氨酸突变体的SDS-PAGE（12%）蛋白marker；2：apoA-Iwt；3：apoA-IM；4：apoA清实验实验测定混合rHDL的脂质结合能力，其对项简单方便的实验方法[37]，研究发现DMPCrystalinetransitiontem....

图2.3各组混合rHDL加入后DMPC随时间变化的浊度DMPC与混合rHDL反应会使325nm吸光度下降，在40分钟内，每3分钟记录325nm处吸光度，绘制成随时间变化的函数

23图2.3各组混合rHDL加入后DMPC随时间变化的浊度DMPC与混合rHDL反应会使325nm吸光度下降，在40分钟内，每3分钟记录325光度，绘制成随时间变化的函数。A：apoA-Iwt组；B：apoA-IM组；C：apoA-I(N....

本文编号：4027727