SMO蛋白抑制剂8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶衍生物的设计、合成及生物活性评价

发布时间：2025-03-18 05:55

　　研究背景Hedgehog信号通路在胚胎发育、分化、机体内环境稳定、组织修复等生长发育和生理过程中起着重要作用。近年来发现Hedgehog信号通路在多种肿瘤组织中被异常激活,进一步研究表明Hedgehog信号通路的异常激活与肿瘤细胞的增殖分化、凋亡、血管新生以及侵袭转移等密切相关。Hedgehog信号通路的组成主要包括以下几个部分:Hedgehog（Hh）配体,Patched（Ptch）蛋白,smoothened（SMO）蛋白,glioma associated oncogene homolog（Gli）转录因子及其下游靶基因。SMO蛋白作为Hedgehog信号通路的中间转导靶点,在其下游存在一个庞大的传递Hh信号的胞内多分子网络,主要包括suppressor of fused（Sufu）、protein kinase A（PKA）、glycogen synthase kinase 3（GSK3）以及 dual-specificity tyrosine phosphorylation-regulated kinase-1A（DYRK1）等,信号传递最终修饰Gli转录因子而调控目的基因的表达...

【文章页数】：137 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-A]吡啶衍生物的设计、合成
    1.1 8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶衍生物的设计
    1.2 8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶衍生物的合成路线
    1.3 实验材料
    1.4 8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶衍生物的合成
第二部分 8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-A]吡啶衍生物的活性检测
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要实验试剂
        2.1.4 主要试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞复苏
        2.2.2 细胞冻存
        2.2.3 细胞的传代
        2.2.4 细胞的计数
        2.2.5 蛋白免疫印迹
        2.2.6 MTT法测肿瘤细胞细胞活力
        2.2.7 平板克隆形成实验
        2.2.8 细胞划痕实验
        2.2.9 细流式细胞术
        2.2.10 分子对接模拟实验
        2.2.11 化合物体内吸收(absorption)、分布(distribution)、代谢(metabolism)、排泄(excretion) (ADME)性质预测
        2.2.12 双荧光素酶实验
        2.2.13 表面等离子共振实验
        2.2.14 荧光共聚焦实验
        2.2.15 小鼠体内急性毒性实验
        2.2.16 裸鼠体内实验
    2.3 实验结果
        2.3.1 8-氯-3-(5-氨基-2-氯苯基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-a]吡啶衍生物与SMO蛋白分子对接模拟的评分
        2.3.2 分子对接模拟实验
        2.3.3 8-氯-3-(5-氨基-2-氯苯基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-a]吡啶衍生物ADME性质预测
        2.3.4 8-氯-3-(5-氨基-2-氯苯基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-a]吡啶衍生物双荧光素酶报告基因实验结果
        2.3.5 表面等离子共振实验
        2.3.6 化合物A3、A14对细胞质中SMO蛋白向初级纤毛迁移的影响
        2.3.7 8-氯-3-(5-氨基-2-氯苯基)-[1,2,4]三氮唑并[4,3-a]吡啶衍生物对肿瘤细胞细胞增殖的影响
        2.3.8 化合物A14对结肠癌细胞克隆形成能力的影响
        2.3.9 化合物A14对结肠癌细胞细胞周期的影响
        2.3.10 化合物A14对结肠癌细胞细胞凋亡的影响
        2.3.11 化合物A14对结肠癌细胞细胞迁移的影响
        2.3.12 化合物A14对Hedgehog信号通路上下游蛋白表达的作用
        2.3.13 化合物A14对结肠癌细胞HT-29以及RKO中细胞质中SMO蛋白向初级纤毛迁移的影响
        2.3.14 化合物对A14于小鼠体内的急性毒性实验
        2.3.15 化合物A14对HT-29细胞体内增殖的影响
    2.4 讨论
    2.5 实验结论
参考文献
附图
攻读学位期间成果
致谢



本文编号：4036107