以hURAT1为靶点的排尿酸药物体外细胞筛选模型的建立和应用

发布时间：2017-08-02 12:11

  本文关键词：以hURAT1为靶点的排尿酸药物体外细胞筛选模型的建立和应用

  更多相关文章： 人尿酸盐阴离子转运体 尿酸 慢病毒载体 MDCK细胞模型 药物筛选与评价 同位素标记法 抑制剂

【摘要】：人尿酸盐阴离子转运体1(human urate anion transporter 1,hURAT1)是人肾小管重吸收尿酸的主要转运蛋白,以hURAT1为靶点,筛选hURAT1抑制剂是近年来降尿酸药物开发的热点,因此建立hURAT1抑制剂体外细胞筛选模型具有重要的意义与实用价值。本实验首先构建了表达SLC22A1 2(hURAT1编码基因)的慢病毒载体,感染MDCK细胞后,通过G41 8筛选出稳转细胞株(稳转株);随后采用W estern-blot及免疫荧光方法检测目的蛋白的表达,并通过液闪计数仪检测hURAT1稳转株对[~(14)C]尿酸的摄取作用及hURAT1抑制剂苯溴马隆、丙磺舒对[~(14)C]尿酸摄取的抑制效果。实验结果显示,hURAT1稳转株目的蛋白表达量为对照稳转株的两倍,并且吸收尿酸的量明显大于对照细胞(P0.001)。此外,实验中测得hURAT1稳转株对尿酸吸收的Km值为365.4μmol/L,苯溴马隆及丙磺舒对尿酸吸收的IC_(50)分别为0.1 8μmol/L和66.82μmol/L。以上结果表明,本实验成功构建了稳定表达hURAT1的MDCK细胞株,并建立了一套hURAT1抑制剂体外准确筛选和评价的方法体系。
【作者单位】： 南方医科大学药学院广东省新药筛选重点实验室;
【关键词】： 人尿酸盐阴离子转运体 尿酸 慢病毒载体 MDCK细胞模型 药物筛选与评价 同位素标记法 抑制剂
【基金】：广东省科技计划项目(2014A020210013)
【分类号】：R91
【正文快照】： 高尿酸血症是人体内嘌呤代谢紊乱致使血液中尿酸增多而引起的一种代谢性疾病。近年来我国高尿酸血症的发病率不断升高,血液尿酸过高可引起痛风、关节组织纤维化甚至坏死、肾功能损伤以及心血管疾病等诸多疾病[1]。目前临床上常用的降尿酸药物,如苯溴马隆、丙磺舒、别嘌醇等,在

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本文编号：609212