热稳定酯酰辅酶A合成酶的异源表达及酶学特性

发布时间：2017-09-04 21:09

  本文关键词：热稳定酯酰辅酶A合成酶的异源表达及酶学特性

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【摘要】：【目的】为寻找能合成丙酰辅酶A和丁酰辅酶A等聚酮合成前体的生物催化剂,用体外酶学实验对一个酯酰辅酶A合成酶进行了表征。【方法】利用丙二酰辅酶A合成酶作为输入序列,通过BLAST程序在Caldicellulosiruptor owensensis OL的基因组中找到1个酯酰辅酶A合成酶基因。在大肠杆菌中进行了异源表达,并通过亲和层析进行纯化。底物谱、最适反应条件、稳定性和动力学参数通过体外酶学实验进行表征,而定点突变则用于活性中心的氨基酸残基的分析。【结果】该酶具有较好的底物宽泛性,可识别丙酸、丁酸、2-甲基丙酸、戊酸、3-甲基丁酸、2-甲基丁酸以及环己甲酸等一系列单酸。反应最适温度为30°C,最适p H为7.0。70°C保温8 h后仍有45%的活性残留,表明该酶相对比较稳定。通过活性中心3个位点的定点突变可以改变酶的底物特异性。【结论】C.owensensis OL来源的酯酰辅酶A合成酶是潜在的生物催化剂,可以用于聚酮前体的合成。
【作者单位】： 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室;中国科学院大学;
【关键词】： 热稳定性 酯酰辅酶A合成酶 底物特异性 酶学性质 定点突变
【基金】：国家“973计划”(2013CB734000) 国家自然科学基金(31370101,31570056) 北京市自然科学基金(5144031) 青年千人计划和中国科学院启动资金~~
【分类号】：R914
【正文快照】： 聚酮是由细菌、真菌及植物等产生的一大类结构复杂多样的天然产物,在现代医疗中发挥重要作用,如抗感染、抗肿瘤以及免疫抑制等[1 3]。聚酮的生物合成与脂肪酸类似,由辅酶A(coenzyme A,Co A)活化的短链酸通过连续的脱羧聚合形成聚酮核心骨架,再经一系列复杂的后修饰而形成,如

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本文编号：793843