类风湿关节炎靶向地塞米松高分子前药的研究

发布时间：2017-10-08 23:14

  本文关键词：类风湿关节炎靶向地塞米松高分子前药的研究

  更多相关文章： 类风湿关节炎 地塞米松 HPMA 前药 药效学 靶向

【摘要】：类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的全身性自身免疫性疾病。作为临床上治疗RA的可选药物之一,糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)短期冲击疗法或低剂量长期应用均存在严重的不良反应,临床应用受到限制。本研究对糖皮质激素经典代表药物地塞米松(dexamethasone,Dex)进行修饰,使其具有一定的靶向炎性关节能力,从而达到增效减毒的效果。本文第一部分内容为聚N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(N-(2-hydroxy-propyl)methacrylamide,HPMA)与地塞米松接合物(P-Dex)的合成研究。以甲基丙烯酰氯,1-氨基-2-丙醇,双甘氨肽(glycylglycine,GG)为原料,合成HPMA和结构衍生物MA-Gly-Gly-OH。在失水剂二环己基碳二亚胺(Dicyclohexylcarbodiimide,DCC)作用下,MA-Gly-Gly-OH与乙醇成酯,再与水合肼氨解成为酰肼。乙酸催化下,酰肼与目标药物Dex腙键接合制备载药单体MA-Gly-Gly-NHN=Dex,通过核磁共振氢谱法(~~1H-NMR)验证Dex与MA-Gly-Gly-OH的接合。HPMA与MA-Gly-Gly-NHN=Dex经可逆加成-断裂链转移聚合(reversible addition-fragmentation chain transfer polymerization,RAFT)得到P-Dex,考察了单体(HPMA和MA-Gly-Gly-NHN=Dex)、引发剂(偶氮二异丁腈,azobisisobutyronitrile,AIBN)和RAFT试剂(三硫代碳酸酯)不同比例对自由基聚合反应的影响,确定最佳HPMA、MA-Gly-Gly-NHN=Dex、AIBN和RAFT试剂比例为16(25)1.13(25)0.043(25)0.13,反应温度60℃,目标产物P-Dex的产率为97.4%。本文第二部分以溶解度,载药量,体外释药特性为指标对P-Dex质量进行评价。所制备的P-Dex溶解度为12.5 g,水溶性良好。建立HPLC测定Dex方法,所采用的方法下,Dex峰形良好,基质无干扰。标准曲线的线性方程:A=6966.7ρ+4.0921,R2=0.9998。Dex在1μg·ml-1~200μg·ml-1范围内线性良好。方法低、中、高日内精密度RSD分别为0.29%、0.75%、0.46%,低、中、高日间精密度RSD分别为3.43%、1.79%、0.72%。HCl水解P-Dex后测定其Dex含量,测得P-Dex中Dex质量百分数为4.59%。考察P-Dex在p H=5和p H=7.4 PBS缓冲体系条件下的体外释药。P-Dex在p H=5条件下,能够缓慢释放Dex,释药速率稳定,为零级动力学。测定14 d内,Dex的累积释放达到12.04%,平均每日释放0.86%。P-Dex在p H=7.4的缓冲体系中,几乎不释放Dex。第三部分为药效学实验。完全弗氏佐剂皮内注射建立佐剂关节炎(adjuvant-induced arthritis,AIA)模型。模型大鼠随机分为对照组、试验组和模型组,并设健康大鼠空白组。对照组给予地塞米松磷酸钠(Dexamethasone sodium phosphate,Dsp),试验组给予P-Dex,模型组和空白组给予生理盐水。以踝关节直径和足掌厚度改变值、踝关节组织病理切片HE染色为指标考察P-Dex对AIA模型的治疗作用。结果显示,19~25 d,试验组与对照组踝关节直径改变值以及足掌厚度改变值相比,改变值更小(P0.05)。踝关节HE染色观察显示试验组滑膜增生,软骨损坏少于对照组和模型组,与空白组相似。所制备的P-Dex能够抑制AIA模型的关节炎症,阻止疾病进展,作用优于Dsp静脉注射。第四部分为P-Dex药动学及靶向特性评价。建立高效液相色谱质谱串联(LC-MS/MS)测定体内Dex方法。各组织基质效应在80%~105%间,回收率均在80%以上。高、中、低三个浓度的日内精密度分别为5.5%,4.2%,1.1%。高、中、低日间精密度分别为14.9%,6.7%,12.6%。专属性良好,精密度和基质效应符合检测要求。P-Dex及Dsp给药后,取样制备匀浆液,经甲基叔丁基醚提取后,挥干、复溶处理进样,以泼尼松(prednison,Pdn)为内标,测定组织样品中的Dex。DAS 2.0软件计算处理药动学参数。药-时曲线下面积(Area under the curve,AUC)采用统计矩法计算。P-Dex给药后,血浆中游离Dex浓度极低,快速消除。P-Dex在血浆中AUC0-∞为游离Dex的1万倍以上,为Dsp的350倍。P-Dex血浆消除半衰期(T1/2)为32 h,消除缓慢,显著延长Dex在体内滞留时间。体内药物分布显示,P-Dex给药后,在血浆和各组织中,游离Dex均有分布,以脾脏、踝关节组织分布最为明显。P-Dex在各组织中的AUC0-∞排序依次是血浆脾肝踝关节肺肾心,表明P-Dex主要分布在血浆、脾、肝和踝关节组织中。Dsp给药后主要在肝脏组织中测得极大值,在各组织中的AUC0-∞排序依次是肝肾肺心踝关节脾血浆。以靶向效率(Targeting efficency,Te)和相对摄取率(Relative intake rate,Re)作为P-Dex靶向炎性关节性能评价指标。踝关节周围组织中P-Dex与Dsp对比Re=1.22;Dsp在踝关节周围组织中Te(Dsp)=0.09,游离Dex在踝关节周围组织中Te(Dex)=0.82。所制备的P-Dex提高了Dex靶向炎性关节性能;P-Dex具有选择性在踝关节周围组织释放Dex的性能。
【关键词】：类风湿关节炎 地塞米松 HPMA 前药 药效学 靶向
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照6-8
• 中文摘要8-12
• 英文摘要12-17
• 前言17-20
• 第一部分P-Dex聚合物接合药物的合成20-29
• 第一节 HPMA-Dex接合物单体合成20-26
• 1 仪器与材料20-21
• 2 方法与结果21-24
• 3 讨论24-25
• 4 小结25-26
• 第二节 P-Dex聚合物的合成26-29
• 1 仪器与材料26
• 2 方法与结果26-27
• 3 讨论27-28
• 4 小结28-29
• 第二部分 P-Dex质量评价及体外释放29-39
• 第一节 P-Dex溶解度考察29-31
• 1 仪器与材料29
• 2 方法与结果29
• 3 讨论29-30
• 4 小结30-31
• 第二节 P-Dex中Dex含量测定31-36
• 1 仪器与材料31
• 2 方法与结果31-34
• 3 讨论34
• 4 小结34-36
• 第三节 P-Dex体外药物释放研究36-39
• 1 仪器与材料36
• 2 方法与结果36-37
• 3 讨论37-38
• 4 小结38-39
• 第三部分 P-Dex对类风湿关节炎大鼠模型的治疗作用评价39-47
• 第一节 AIA大鼠模型的建立39-42
• 1 仪器与材料39-40
• 2 方法与结果40-41
• 3 讨论41
• 4 小结41-42
• 第二节 P-Dex对AIA大鼠模型的治疗作用42-47
• 1 仪器与材料42
• 2 方法与结果42-46
• 3 讨论46
• 4 小结46-47
• 第四部分 P-Dex药动学、组织分布及靶向性评价47-57
• 1 仪器与材料47
• 2 方法与结果47-55
• 3 讨论55
• 4 小结55-57
• 全文总结57-59
• 参考文献59-63
• 文献综述 基于聚HPMA的高分子前药研究进展63-79
• 1. HPMA聚合物简介63-64
• 2. HPMA聚合物接合药物结构特征64-66
• 3. 间隔基团在HPMA聚合物接合物中的应用66-67
• 4. HPMA聚合物靶向策略67-69
• 5. HPMA聚合物接合物在不同疾病治疗中的应用69-71
• 6 结语与展望71-72
• 参考文献72-79
• 致谢79-80
• 硕士期间发表的论文80

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