紫草素对伯基特淋巴瘤治疗干预及分子机制的研究

发布时间：2020-04-22 13:38

【摘要】：目的:研究紫草素对伯基特淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma,BL)细胞的杀伤作用;研究紫草素诱导BL细胞凋亡的分子调控机制;研究紫草素对BL细胞中C-MYC和PI3K/AKT/m TOR信号通路的影响;研究紫草素和多柔比星的联合作用。方法:(1)MTT法检测不同浓度及时间点紫草素对Namalwa和Raji 2株BL细胞株的生长抑制作用。(2)Propidium Iodide(PI)/Hoechst双染,荧光显微镜观察紫草素作用前后细胞核形态及PI可染细胞(细胞膜完整性缺失)比例的变化。(3)Annexin V/7-AAD双染,流式细胞仪检测分析紫草素作用前后BL细胞凋亡比率的改变以及加入凋亡抑制剂Z-VAD-FMK后对紫草素作用的影响。(4)Western Blot检测紫草素作用后BL细胞内凋亡通路及C-MYC和PI3K/AKT/m TOR信号通路的相关蛋白表达水平的变化。(5)荧光定量PCR检测紫草素对BL细胞内mi R-19a表达的影响。(6)构建BL荷瘤小鼠模型,观察紫草素对小鼠体重及瘤体生长影响;治疗结束取瘤称重并进行HE染色、免疫组化、WB和PCR相关检测。结果:(1)紫草素可抑制BL细胞株的生长,且抑制强度与紫草素浓度和作用时间呈正相关。(2)PI/Hoechst双染实验结果表明紫草素可引起BL细胞胞核出现凋亡特征性变化,提示诱导凋亡是紫草素杀死肿瘤细胞的主要方式。(3)流式结果显示随着紫草素浓度的递增,Annexin V+/7-AAD-和Annexin V+/7-AAD+的凋亡细胞比率显著增加,且Z-VAD-FMK能减弱紫草素诱导凋亡作用。(4)Western Blot检测结果显示紫草素可引起凋亡信号通路中Caspase-3、8、9和PARP的剪切激活,抑制C-MYC和PI3K/AKT/m TOR信号通路中相关蛋白的表达。(5)q-PCR结果表明紫草素可抑制mi R-19a的表达。(6)体内实验证明紫草素可通过C-MYC和PI3K/AKT/m TOR信号通路显著抑制荷瘤小鼠瘤体生长,且对小鼠的体重和肝功能无明显影响。(7)紫草素能协同多柔比星发挥抗癌作用。结论:(1)无论是在体外还是体内,紫草素具有十分强效的抗BL细胞作用。(2)C-MYC和PI3K/AKT/m TOR信号通路的抑制可能参与了紫草素抗癌机制的调控。(3)联合运用紫草素和阿霉素来治疗干预BL是潜在可行的。
【图文】：

杀伤作用的 IC50 值，选择 5 个浓度梯度的紫草素分如图 1.2.1.3 所示，紫草素对 Raji 和 Namalwa 细胞的 2.67 nM。这表明相较 Raji 细胞，Namalwa 细胞对紫草

果如图 1.2.1.3 所示，，紫草素对 Raji 和 Namalwa 细胞的 24192.67 nM。这表明相较 Raji 细胞，Namalwa 细胞对紫草素 1.2.1.1 不同浓度的紫草素在不同时间点对 Raji 细胞的生长抑制作
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

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本文编号：2636577