口蹄疫病毒前导蛋白抑制NF-κB介导的Ⅲ型干扰素表达的研究

发布时间：2022-12-08 06:31

　　口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）是家畜口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）的病原,主要侵染牛、羊、猪等偶蹄动物,引起传染性极强的群发疫病。该病的特征症状是口、鼻、蹄和乳房等部位出现水疱,可见FMDV主要侵染宿主的上皮组织。近几年发现的IFN-λ3是III型干扰素（interferon,IFN）的成员之一,主要产生靶向上皮组织的专一抗病毒效果。目前,对FMDV与猪源IFN-λ3的关系了解甚少,因此,猪源IFN-λ3的研究将为更加有效防控FMD提供新的思路。FMDV前导（leader）蛋白(L^pro)是拮抗宿主细胞天然免疫应答的重要蛋白。L^pro能通过多种途径调控IFN的表达,推测也能调控IFN-λ3的产生。为了获得抗L^pro抗体,本研究采用原核表达获得了重组L^pro,利用其制备了高效价的兔抗血清,该血清能够特异性识别FMDV感染过程中产生的L^pro。为了获得猪源IFN-λ3蛋白,将猪源IFN-λ3基因定向克... 

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 FMDV的研究进展
        1.1.1 FMDV简介
        1.1.2 FMDV L~(pro)的功能
    1.2 Ⅲ型 IFN研究进展
        1.2.1 IFN简述
        1.2.2 Ⅲ型 IFN的表达调控
        1.2.3 Ⅲ型 IFN信号转导通路
        1.2.4 Ⅲ型 IFN的抗病毒作用
        1.2.5 病毒拮抗Ⅲ型 IFN产生的分子机制
    1.3 本实验的研究目的及意义
第二章 FMDV L~(pro)多克隆抗体的制备及鉴定
    2.1 材料
        2.1.1 质粒、病毒与细胞
        2.1.2 主要材料和试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 方法
        2.2.1 L~(pro)原核表达质粒的构建及鉴定
        2.2.2 重组L~(pro)的诱导表达及鉴定
        2.2.3 重组L~(pro)的纯化
        2.2.4 重组L~(pro)的 Western blotting鉴定
        2.2.5 L~(pro)多克隆抗体的制备及鉴定
        2.2.6 L~(pro)多克隆抗体与FMDV的反应
    2.3 结果
        2.3.1 L~(pro)原核表达质粒的鉴定
        2.3.2 重组L~(pro)的诱导表达
        2.3.3 重组L~(pro)的纯化及鉴定
        2.3.4 L~(pro)多克隆抗体的制备及鉴定
        2.3.5 L~(pro)多克隆抗体与FMDV的反应性
    2.4 讨论
第三章 猪源IFN-λ3蛋白的原核表达及纯化
    3.1 材料
        3.1.1 质粒与细胞
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器
    3.2 方法
        3.2.1 猪源IFN-λ3原核表达质粒的构建及鉴定
        3.2.2 猪源IFN-λ3重组蛋白的诱导表达及鉴定
        3.2.3 猪源IFN-λ3重组蛋白的纯化
        3.2.4 猪源IFN-λ3重组蛋白的复性及浓缩
    3.3 结果
        3.3.1 猪源IFN-λ3原核表达质粒的鉴定
        3.3.2 猪源IFN-λ3重组蛋白的诱导表达
        3.3.3 猪源IFN-λ3重组蛋白的纯化与鉴定
    3.4 讨论
第四章 FMDV L~(pro)拮抗IFN-λ3抗病毒作用的分子机制研究
    4.1 材料
        4.1.1 质粒、病毒与细胞
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要仪器
    4.2 方法
        4.2.1 细胞培养
        4.2.2 p65/RelA真核表达质粒的构建
        4.2.3 细胞转染
        4.2.4 实时荧光定量PCR
        4.2.5 Western blotting
        4.2.6 蚀斑形成试验
        4.2.7 间接免疫荧光试验
        4.2.8 统计学方法
    4.3 结果
        4.3.1 p65/RelA真核表达质粒的构建及表达验证
        4.3.2 猪源IFN-λ3 抑制FMDV复制
        4.3.3 si RNA干扰猪源IFN-λ3 促进FMDV复制
        4.3.4 FMDV感染抑制poly(I:C)诱导的IFN-λ3 表达
        4.3.5 FMDV L~(pro)抑制poly(I:C)诱导的IFN-λ3 表达
        4.3.6 L~(pro)抑制IFN-λ3 表达的能力与其切割功能相关
        4.3.7 p65/RelA通过上调IFN-λ3 表达抑制FMDV的复制
        4.3.8 L~(pro)降解内源p65/RelA,切割外源p65/RelA
        4.3.9 L~(pro)与p65/RelA共定位,且切割功能不是共定位所必需的
        4.3.10 L~(pro)抑制p65/RelA诱导的IFN-λ3 表达,该能力与其切割功能相关
    4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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[4]悬浮培养Sf21细胞高效表达牛γ-干扰素及其特性鉴定[J]. 王海春,贾红,袁维峰,侯绍华,郭晓宇,鑫婷,朱鸿飞.  中国畜牧兽医. 2012(11)
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[6]重组干扰素-tau在大肠杆菌中的高效表达[J]. 付加雷,宋长征,张更林.  食品与药品. 2006(11)
[7]重组人干扰素α2b包涵体纯化方法的研究[J]. 杨欣,曾献武,严君喜,王艳.  中国生化药物杂志. 2001(06)



本文编号：3713739