蛋清溶菌酶分离纯化实验的改进

发布时间：2021-08-04 15:46

　　蛋白质分离纯化技术是生化及分子生物学实验技术的重要组成部分,在本科实验教学中占有重要地位。为了探索合适的实验方法和实验条件,优化本科实验教学中的溶菌酶分离纯化实验,以获得更好的纯化结果和教学效果,该文使用离子交换层析、硫铵沉淀、分子筛层析等方法成功地从蛋清中纯化出高纯度的溶菌酶,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法鉴定了样品纯度,并用溶壁微球菌做为底物测定了纯化酶的活力及比活力。结果显示,使用改进后的方法能够得到较高纯度和比活力的溶菌酶,整个实验重复性好、易于操作,适合作为本科教学实验项目。 

【文章来源】：实验技术与管理. 2020,37(08)北大核心

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

离子交换层析OD280-时间曲线

配制变性聚丙烯酰胺凝胶（15%分离胶、4%浓缩胶）。分别对离子交换层析得到的各馏分取少量进行电泳。用考马斯亮蓝R250染色法显示电泳结果。部分结果如图2所示。其中，a为离子交换层析时用200 mmol/L NaCl溶液洗脱所得馏分中一部分样品的电泳结果，M:marker按分子量大小判断，其中最下方的条带应为溶菌酶的条带；b的M:marker图2左起第二、三泳道所点样品分别取自鸡蛋清和Sample1，右侧诸泳道中所点样品取自500 mmol/L NaCl溶液洗脱所得各馏分，按分子量大小判断，最下方的条带应为溶菌酶的条带。2.3.3 盐析及重悬

进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析分子筛纯化结果如图4所示。筛选出电泳条带单一的馏分，混合均匀作为Sample3（测体积）。图4 分子筛层析各馏分的SDS-PAGE结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]重组人溶菌酶滴眼液在兔眼房水中的药物含量分析[J]. 史瑾,翟宁宁,李晓颖,杨小琳,赵金礼.  中国新药杂志. 2019(15)
[2]蛋壳残留蛋清中溶菌酶高效提取技术的研究[J]. 李逢振.  农产品加工. 2017(24)
[3]溶菌酶的分离方法及进展[J]. 宋娟.  河南化工. 2017(07)
[4]生物溶菌酶的提取应用及发展前景研究[J]. 李秋雁.  现代盐化工. 2017(02)
[5]猪溶菌酶在大肠杆菌中的表达及其复性[J]. 朱德伟,蔡国林,陆健.  食品与发酵工业. 2016(10)
[6]天然微生物防腐剂溶菌酶在食品中的应用研究[J]. 崔红.  中国食物与营养. 2015(12)
[7]溶菌酶的活性检测方法[J]. 宋美娜,仝其根.  中国农学通报. 2012(12)
[8]海藻酸钠和溶菌酶复合涂膜对马陆葡萄贮藏的保鲜效果[J]. 胡晓亮,周国燕.  食品科学. 2011(20)
[9]蛋清溶菌酶部分酶学性质及酶活性的影响因素研究[J]. 刘慧,王凤山,楚杰.  中国生化药物杂志. 2008(06)
[10]溶菌酶及其应用[J]. 李敏.  生物学教学. 2006(04)



本文编号：3321971