转基因抗虫早粳稻HD3品系外源基因的整合、表达及其农艺性状

发布时间：2020-05-17 12:35

【摘要】：水稻(Oryza sativa L.)是我国最主要的粮食作物之一。黑龙江省是我国水稻的主要产区,常年遭受虫害的影响,造成严重的经济损失。如果如果我们只是靠焚烧秸秆的传统方法和化学农药方法防治虫害,长此以往,不但会使害虫产生抗药性,还会对生态环境造也会成严重破坏。传统的育种方式不单耗时过长,耗资庞大,而且难以培育出具有优良抗虫性状的水稻品种。所以,运用分子生物学技术手段,培育出导入Bt基因的抗虫水稻便成为有效解决此类问题的新途径。松粳9号是寒区超级稻品种,以其高产抗病、米质优良等特性已在黑龙江广泛种植多年。本实验以导入Bt基因的松粳9号HD3品系为实验材料,对其外源基因的整合、遗传及表达等方面进行检测,并考察其农艺性状以评估其商业化价值。主要研究结果如下:1、通过对T9~T11连续三个世代间行Basta抗感性筛选、PCR检测以及胶体金免疫层析试纸条检测等实验,得出转cry1C*基因松粳9号HD3品系的外源基因在世代间稳定性遗传的结论。2、利用实时荧光定量PCR检测目的基因cry1C*的转录水平得出:目的基因cry1C*的转录水平在不同生长阶段的同一组织中存在差异;同一生长阶段同一转基因品系的不同组织中目的基因cry1C*的转录水平也存在明显差异。酶联免疫吸检测得出结果表明:不同组织中的cry1C蛋白的含量差异显著,其中cry1C蛋白含量最高的是叶片,最低的是糙米。3、通过Southern印记杂交检测转基因抗虫早粳稻HD3品系外源基因拷贝数,得出其中HD3-1为双拷贝;HD3-2为单拷贝的整合结果。利用巢式PCR方法对单拷贝的HD3-2品系中的T-DNA区进行侧翼序列分离,并对产物进行测序比对,确定其位于第3号染色体上,且外源基因的表达框架结构完整。4、在农艺性状及稻米品质方面,转cry1C*基因抗虫早粳稻HD3品系对照组松粳9号相比除株高外无显著性差异。
【图文】：

第 3 章 结果与分析因水稻外源基因的遗传稳定性ta 抗感性筛选 转基因抗虫早粳稻 HD3 品系水稻喷洒 Basta 7 天后所得结果，转基因抗虫早粳稻 HD3-1 和 HD3-2 植株健康生长，对照该结果说明，外源标记基因 bar 基因已转入到 HD3 品系水理论上讲，和 bar 基因一起导入受体水稻品系松粳 9 号核基1C*存在且表达。

y1C*基因表达的定量检测RNA 的表达量出 T11 代转基因抗虫早粳稻 HD3 品系与空白对照组松粳 9 号苗的茎鞘、叶片与幼穗的总 RNA，，进行琼脂糖凝胶电泳实验，实示。该电泳图中显示：HD3 品系水稻及其对照松粳 9 号都显示品的 18S 与 28S 的 rRNA 条带清楚可见，没有降解现象和掺杂 D。该结果说明，所提取的水稻各组织样品 RNA 质量良好，可用验，合成 cDNA 第一链。
【学位授予单位】：黑龙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S511.22

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本文编号：2668560