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蓖麻RcDELLA(GAI)蛋白的表达、纯化与晶体生长条件的筛选

发布时间:2020-07-26 17:07
【摘要】:蓖麻(Ricinus communis L.)是一种重要的油料作物,具有较高的经济价值及市场地位。矮化蓖麻具有产量高、利于机械化收获等优点,成为近几年蓖麻研究工作者的主攻方向。赤霉素(GA)是调节植物株高的重要激素,DELLA蛋白是GA信号转导途径的关键调控元件,负向调节GA信号途径,参与GA的降解,阻遏植物的生长和发育。本研究拟利用大肠杆菌表达系统对RcDELLA基因进行诱导表达,利用多步层析技术纯化该蛋白,进行晶体生长条件的筛选,为深入研究DELLA生物学功能及其结构解析工作奠定基础。本研究克隆了RcDELLA(GAI)基因,构建了pHAT-2-RcDELLA等7个原核表达载体,热激转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,在0.1 mM IPTG、16℃、12-15h条件下进行诱导表达,所得蛋白通过His柱亲和层析、阴离子交换层析及分子筛层析,得到带电性质均一、单分散性较好的蛋白。质谱结果显示其为目标蛋白,分子量为62.853 KD,该蛋白为单体形式存在。进行RcDELLA蛋白结晶条件筛选,在3种缓冲条件下有晶体产生的迹象:0.1 M Sodium citrate tribasic dihydrate pH 5.0,30%V/V Jeffamine ED-2001 pH 7.0,0.2 M Ammonium acetate,0.1 M Tris pH 8.0,16%W/V Polyethylene glycol 10000,0.2 M Sodium nitrate,20%W/V Polyethylene glycol 3350,晶体性质有待进一步验证。
【学位授予单位】:内蒙古民族大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S565.6

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本文编号:2771045

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