欧洲缬草不定根培养体系的初步建立

发布时间：2020-08-26 02:46

【摘要】：欧洲缴草(Valeriana oficinalis L.s.l.)以根及根茎入药,具有镇静安神、解挛止痛、抗抑郁和抗肿瘤、抗心律失常和胃肠平滑肌解痉等药理活性,近年来,随着人们生活节奏的加快,生活压力的增大,失眠、抑郁症和肿瘤等疾病越来越多,对缬草提取物及其制剂的需求日益增加。但是野生缬草资源急剧下降,自然生长和人工栽培的缬草,根系生长缓慢,而活性成分主要存在于缬草的根系中。因此,利用组织培养技术大量繁殖欧洲缬草不定根,以其不定根作为药材原材料是解决缬草提取物及其制剂供应不足问题的有效手段。本研究以欧洲缬草种子为材料培养无菌苗,以无菌苗的茎、叶为外植体诱导不定根,经继代和增殖后选择粗细均匀的不定根探讨生长素、培养基种类、pH、碳源种类、糖浓度、盐浓度、总N浓度和总P浓度等因素对不定根悬浮培养的影响,得到不定根悬浮培养的优化条件,初步建立不定根高效培养的体系,考察此体系下不定根的生长状况以及缬草三酯、乙酰缬草三酯和缬草烯酸的含量,为进一步利用生物反应器获得有效成分高产的欧洲缬草不定根系奠定基础。研究结果表明:1、在不同消毒剂和消毒时间组合处理中,用4%的NaClO溶液浸10 min,种子无污染,发芽率最高达76%。2、欧洲缬草不定根诱导的理想条件是:外植体为茎段,培养基MS+0.5 mg·L-1 NAA。3、欧洲缬草不定根悬浮培养的理想条件是:2倍大量元素、48.46 mmol·L-1总N浓度、1.5mmo·L-1总P浓度的RCM培养基,添加蔗糖40g·L-1,NAA0.5 mg·L-1,pH=5.7,第28d宜收获或继代培养。4、理想体系下培养的正常不定根中3种有效成分的含量较高,缬草三酯为7.222mg·g-1,缬草烯酸为4.016mg·g-1,乙酰缬草三酯为0.355 mg·g-1,缬草烯酸的含量高于二年生栽培根。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S567.239
【图文】：

外植体,茎段,不定根,培养基

逡逑根数最多但较细短（图３－２－Ｆ）。从数据和图片综合来看，不论是外植体为茎段逡逑还是外植体为叶片，４号培养基生根率、总根数最高且不定根生长旺盛、粗长，逡逑与其它培养基均达到差异显著性水平（Ｐ＜0．0５），说明４号培养基是ＮＡＡ诱导不逡逑定根的理想培养基

不定根,外植体,生根率,叶片

随ＩＡＡ浓度的增加不定根生根率先降低后稍有增加，之后又大幅度降低，逡逑当ＩＡＡ浓度为０．０５邋ｍｇ＇Ｌ－１时，生根率最高，达８０．５６％，并且生根数较多，生长逡逑旺盛、不定根粗长（图３－３－Ａ）；以叶为外植体时，随ＩＡＡ浓度的增加不定根生逡逑根率先增加后降低

不定根,外植体,叶片,生根率

即邋ＭＳ＋０．０５邋ｍｇ．Ｌ－１邋ＩＡＡ。逡逑ＴＴ逡逑图３－３不同浓度ＩＡＡ诱导的不定根（外植体为茎段）逡逑Ｆｉｇ．邋３－３邋Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ邋ｒｏｏｔｓ邋ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｂｙ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＩＡＡ邋（ｅｘｐｌａｎｔｓ邋ａｒｅ邋ｓｔｅｍｓ）逡逑注：图中大写英文宁叼表示不同的生长素浓度ＡＯ．ＯＳｍｇ邋Ｌ／１邋：Ｂ０．１邋ｎｉｇ邋Ｌ－１邋ｉＣＣＵｍｇ邋Ｌ－１邋〖ＤＯ．Ｓｍｇ邋ｌ／ｈＥ邋１．０逡逑ｍｇ－Ｌ＊１邋：邋Ｆ邋２．０邋ｍｇ－Ｌ＇１邋0逡逑「ｒｒｎｎａ逡逑图３－４不同浓度ＩＡＡ诱导的不定根（外植体为叶片）逡逑Ｆｉｇ．邋３－４邋Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ邋ｒｏｏｔｓ邋ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｂｙ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＩＡＡ邋（ｅｘｐｌａｎｔｓ邋ａｒｅ邋ｌｅａｖｅｓ）逡逑丨外Ｐ大写英文卞叮表小不同的生长素浓度ＡＯＭｎｉｇ邋Ｌ／１邋？丨ｍｇ邋Ｌ／１〔ＣＯＪｎｉｇ邋Ｌ－１邋：Ｉ）０．５ｍｇ邋Ｌ“：Ｅ邋１．０逡逑ｎｉｇ邋Ｉ邋＇＇邋；邋１：邋２．０邋ｍｇ邋１逡逑３．３．３不同丨ＢＡ浓度及外植体类型对欧洲缬草不定根诱导逡逑不同ＩＢＡ浓度与外植体类型对不定根诱导效果见表３－３，当以茎段为外植体逡逑T，随ＩＢＡ浓度的增加不定根生根率呈逐渐降低的趋势，当ＩＢＡ浓度为０．０５逡逑ｍｇ．Ｌ－１时，生根率最高，达８３．３３％，并且生根数多，不定根生长旺盛且粗长（图逡逑３－５－Ａ），与其它浓度有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）；以叶为外植体时，随ＩＢＡ浓度逡逑的增加不定根生根率先增加后降低，当ＩＡＡ浓度为０．１邋ｍｇ邋ｌ／１时，不定根生根率逡逑eA高

【参考文献】