水稻NRPC1/NRPC2基因调控GLK的转基因功能验证

发布时间：2021-03-05 07:05

　　光合效率是影响水稻产量的重要因素。在本实验室前期研究中,克隆到两个水稻高光效基因NRPC1（negative regulator of photosynthesis and chloroplast development 1）和NRPC2（negative regulator of photosynthesis and chloroplast development 2）,通过酵母双杂实验发现NRPC1与GLK1和GLK2都发生互作,NRPC2也与GLK1和GLK2发生相互作用。在此基础上,通过转基因技术获得glk1glk2突变体、glk1glk2nrpc1突变体和GLK1/GLK2过表达材料,将其与NRPC材料进行杂交,对获得的材料进行叶绿素含量测定及光合相关基因的表达分析,确定NRPC与GLK之间的上下游关系,阐明两者对叶绿体发育和叶绿素合成的调控机制;利用RNA-Seq及生物信息学分析,筛选出受NRPC1基因调控的下游基因,结合定量分析检测下游相关基因的表达量。首先,构建GLK1/GLK2的CRISPR/Cas9敲除和过表达载体,利用转基因技术,获得glk1glk2突变体、glk... 

【文章来源】：浙江师范大学浙江省

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

植物光系统I的结构模型

2.2 光系统 II光系统 II 是多亚基膜复合物，位于堆积的革兰氏类囊体区域[4,62]，蓝藻中的PSII 超复合物包括 RC 蛋白 PsbA(D1)和 PsbD(D2)，天线亚基 PsbB(CP47)和PsbC(CP43)，膜内在小亚基(PsbE，PsbF，PsbH-M，PsbN，PsbX，PsbY，PsbZ 和PsbYcf12)和 3 个外在亚基(PsbO，PsbU 和 PsbV)(图 1.2)。

3.3 glk1glk2 和 glk1glk2nrpc1 突变体光合相关基因表达及叶绿体观察对 glk1glk2 和 glk1glk2nrpc1 突变体株系进行叶绿素合成及光合相关基因的定量表达分析表明，与野生型相比，nrpc1 突变体表达量显著高于野生型，但是在 glk1glk2 和 glk1glk2nrpc1 突变体中表达量远低于野生型(图 2.4A)。通过电镜切片技术观察叶绿体发育情况，发现在叶肉细胞中，与野生型相比，glk1glk2 和图 2.3 野生型、nrpc1、glk1glk2 和 glk1glk2nrpc1 突变体表型及叶绿素含量Fig.2.3 WT, nrpc1, glk1/glk2 and glk1/glk2/nrpc1 mutant phenotypes and chlorophyll contentA：成熟期植株；B：叶绿素 a(Chla)，叶绿素 b(Chlb)和类胡萝卜素(Car)含量；*表示叶绿素含量与野生型显著不同，t 检验，*P<0.05，**P<0.01。A: mature plants;B: leaf chlorophyll a(Chla), b(Chlb) and carotenoid content;*Indicates that the chlorophylcontent is significantly different from the WT, t-test,*P<0.05,**P<0.01.WT nrpc1 glk1glk2 glk1glk2nrpc1


本文编号：3064790