大豆叶柄离体再生体系初探与胚尖体系转GmBZL2*基因的研究

发布时间：2023-12-10 14:24

　　大豆[Glycin max(Linn.)Merr],又名黄豆,古代称为“菽”,是双子叶植物豆科大豆属的二倍体(2n=40)一年生草本植物。大豆既是重要的高蛋白粮饲兼用作物和油料作物,也是饲料和食品等工业加工制成品的优质原料,而且还是植物功能基因组研究的模式植物。随着耕地的日益减少、病原菌和害虫的侵害、环境的胁迫以及难以杂交授粉等问题的突显,市场上急需高产、稳产、优质的大豆新种质或新品种。然而传统的育种技术和手段,在大豆新种质创制方面遇到了技术瓶颈。随着大豆全基因组测序工作的完成和基因编辑技术的蓬勃发展,遗传转化技术为大豆种质资源新材料的创制提供了快捷而有效的途径。因此,构建高效的大豆遗传转化体系就显得十分必要。目前,关于大豆开展基因工程研究方面,利用根癌农杆菌介导法以胚尖体系和子叶节体系为受体系统的报道比较多见。但是这两个转基因体系存在假阳性率高、嵌合体和转化效率低的缺点。可见,探索全新的大豆遗传转化体系势在必行。而可靠的遗传转化体系必须依赖于高效的离体再生系统。为了克服不定芽导致的遗传转化子的假阳性现象,本课题组以大豆品种“交大青豆”和“K06-82”为试验材料,开展了大豆叶柄的离体...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
1 文献综述
    1.1 大豆离体再生的研究进展
        1.1.1 器官发生途径
        1.1.2 体细胞胚胎发生
        1.1.3 原生质体及单细胞再生
        1.1.4 大豆花粉、花药再生
    1.2 大豆遗传转化研究进展
        1.2.1 农杆菌介导法
        1.2.2 基因枪法
        1.2.3 花粉管通道法
        1.2.4 聚乙二醇(PEG)法
        1.2.5 其他转化方法
    1.3 大豆转基因面临的问题及展望
2 材料与方法
    2.1 大豆叶柄离体再生体系初探
        2.1.1 试验材料
        2.1.2 试验方法
            2.1.2.1 大豆种子的消毒
            2.1.2.2 培养基及培养条件
            2.1.2.3 外植体的取材
            2.1.2.4 大豆叶柄愈伤组织的诱导及继代培养
            2.1.2.5 不定芽的诱导
            2.1.2.6 芽苗伸长
            2.1.2.7 生根
            2.1.2.8 炼苗与移栽
    2.2 大豆胚尖转GMBZL2*的研究
        2.2.1 试验材料
            2.2.1.1 植物材料
            2.2.1.2 菌株和质粒
        2.2.2 试验方法
            2.2.2.1 质粒载体导入农杆菌EHA105及其鉴定
            2.2.2.2 农杆菌EHA105工程菌制备
            2.2.2.3 试剂
            2.2.2.4 农杆菌介导大豆胚尖遗传转化所需培养基及步骤
            2.2.2.5 影响大豆遗传转化的因素研究
            2.2.2.6 转基因大豆的鉴定
    2.3 数据整理与分析
3 结果与分析
    3.1
        3.1.1 NAA对大豆叶柄愈伤组织的诱导
        3.1.2 6-BA和NAA对大豆来源叶柄愈伤组织不定芽分化的影响
        3.1.3 TDZ和AGNO₃对大豆叶柄愈伤组织不定芽分化的影响
        3.1.4 赤霉素(GA₃)对芽苗伸长的影响
        3.1.5 无机盐和IBA浓度对大豆植株生根的影响
    3.2 大豆胚尖体系转GMBZL2*基因
        3.2.1 乙酰丁香酮(AS)对大豆转化的效率影响
        3.2.2 菌液侵染时间对大豆转化效率的影响
        3.2.3 抗生素浓度对抑菌的影响
        3.2.4 筛选方案对抗性芽再生的影响
        3.2.5 抗性芽苗的伸长
        3.2.6 抗性苗的生根
    3.3 大豆转GMBZL2*基因的检测
        3.3.1 GUS基因检测
        3.3.2 PCR检测
4 讨论
    4.1 关于大豆叶柄离体再生体系的研究
        4.1.1 不同比例激素浓度对愈伤组织不定芽的诱导
        4.1.2 起始外植体材料对不定芽诱导的影响
        4.1.3 叶柄再生体系与胚尖再生体系和子叶节再生体系的比较
    4.2 关于大豆胚尖转GMBZL2*基因
5 结论
6 创新点
参考文献
附录A
致谢
研究生学习期间发表文章情况



本文编号：3872580