驼血抗氧化与降糖活性肽的制备与鉴定

发布时间：2020-08-22 09:03

【摘要】：动物血液是畜禽屠宰加工过程中的主要副产品,含有丰富的蛋白质和其他营养素;由于骆驼生存在严酷的恶劣环境中,特殊的环境使其血液与其它动物的血液相比,具有更为特殊的生理、营养功能。然而,驼血利用率极低,造成了极大的浪费。本研究利用酶解法制备驼血多肽,探究不同蛋白酶的驼血酶解产物抗氧化及降糖活性强弱;在此基础上利用超滤、层析等方法对抗氧化与降糖肽进行分离纯化;最后对分离纯化后的抗氧化与降糖肽进行氨基酸组成、分子量分布及氨基酸序列的测定分析。主要研究结果如下:(1)胃蛋白酶在最适pH和温度条件下,酶解时间为3 h,酶浓度为5 mg/100mg,料液比为1:10时,驼血酶解产物有最高抗氧化活性;经进一步分离纯化,该水解产物中组分Pep-1抗氧化活性最强,其DPPH·清除率为72.6%,铁离子螯合能力为94.9%,总抗氧化能力(ABTS法)为1.433 mmol/g。利用全自动氨基酸分析仪对组分Pep-1进行氨基酸组成测定发现其氨基酸含量为73.763 mg/100mg。利用MALDI-TOF-TOF测定组分Pep-1的分子量和氨基酸序列发现其主要由分子量为5107.6484 Da的肽段组成,对该肽段进一步水解测定发现其主要由分子量为1223.6233 Da 的九肽组成,氨基酸序列为 Val-Val-Tyr-Pro-Trp-Thr-Arg-Arg-Phe,大部分由疏水性氨基酸组成。(2)风味蛋白酶在最适pH和温度条件下,酶解时间为4 h,酶浓度为5 mg/100mg,料液比为1:6时,驼血酶解产物有最高α-淀粉酶抑制活性及α-葡萄糖苷酶抑制活性;经进一步分离纯化确定了组分Fla-a的a-淀粉酶抑制率(66.03%)最高,Fla-b的α-葡萄糖苷酶抑制率(90.86%)最高。利用全自动氨基酸分析仪对组分Fla-a和Fla-b进行氨基酸组成测定发现Fla-a氨基酸含量为81 630mg/100mg,组分Fla-b氨基酸含量为49.126 mg/100mg。利用MALDI-TOF-TOF测定组分Fla-a和Fla-b的分子量和氨基酸序列,发现组分Fla-a主要由分子量为722.3637 Da的六肽组成,氨基酸序列为Tyr-Pro-Gly-Glu-Thr-Arg;组分Fla-b主要由分子量为878.4473 Da的六肽组成,氨基酸序列为Tyr-Pro-Trp-Thr-Arg-Arg。结论:本研究分离纯化得到分子量为1223.6233 Da的驼血抗氧化肽Val-Val-Tyr-Pro-Trp-Thr-Arg-Arg-Phe 以及分子量为 722.3637 Da、878.4473 Da的马驼血降糖肽 Tyr-Pro-Gly-Glu-Thr-Arg、Tyr-Pro-Trp-Thr-Arg-Arg。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS201.2;TS251.93
【图文】：

技术路线图,降糖,活性肽,抗氧化

图２技术路线图逡逑Ｆｉｇｕｒｅ．２邋Ｔｈｅ邋ｔｅｃｈｎｉｃａｌ邋ｒｏａｄｍａｐ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｐａｐｅｒ逡逑

标准曲线,标准曲线,蛋白,水解度

浓度（ｍｇ／？ｄ）逡逑图３蛋白标准曲线逡逑Ｆｉｇｕｒｅ．３邋Ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ逡逑称为生命体的物质基础，由２０多种l#基酸（ａｍｉｎｏ邋ａｃｉｄ因此种类很多，相应的性质及功能各不相同。本试验为的分析与研究，对驼血进行了蛋白含量检测，根据蛋白白含量为７８．０３％，因此可以确定驼血中发挥功能活性的白酶单因素试验结果逡逑同酶解时间对驼血水解度的影响逡逑知，随着酶解时间的延长，水解度整体呈现先上升后趋白酶在３邋ｈ时有最大水解度，之后随反应时间的延长水酶则在４邋ｈ时有最大水解度，而后水解度的变化趋于平

酶解液,水解液,风味蛋白酶,复合蛋白酶

Ｆｉｇｕｒｅ．７邋Ｃａｍｅｌ邋ｂｌｏｏｄ邋ａｎｄ邋ｉｔｓ邋ｅｎｚｙｍａｔｉｃ邋ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ邋ＳＤＳ－ＰＡＧＥ逡逑Ｍ：蛋闩标准；１．驼血；２．复合蛋白酶水解液；３．木瓜蛋白酶水解液；４．风味蛋白酶水解液；５．胃水解液逡逑

【参考文献】