坛紫菜多肽的分离纯化、结构鉴定与体外抗氧化活性研究

发布时间：2021-02-03 01:12

　　坛紫菜（Porphyra haitanensis）,主要分布在福建、浙江和广东沿岸,是我国特有的大型经济海藻之一,具有高蛋白、高纤维、低热值、低脂肪的特点,含有丰富的氨基酸（包括8种必需氨基酸）,是生物活性肽的理想蛋白源。本文首先对不同采收期坛紫菜进行营养成分分析和品质评价;其次,采用响应面（response surface methodology,RSM）优化超声波提取坛紫菜蛋白的工艺条件,测定蛋白的基础特性;再次,采用RSM优化酸性蛋白酶酶解坛紫菜蛋白的工艺条件,测定酶解产物体外抗氧化活性;最后,利用凝胶过滤色谱（gel filtration chromatography,GFC）对不同分子量的坛紫菜蛋白抗氧化肽进行分离富集,探讨高抗氧化活性组分对H₂O₂诱导的人肝癌HepG2细胞的氧化损伤的修复作用,同时借助液相色谱/电喷雾质谱（LC/ESI/MS）技术对坛紫菜高抗氧化活性肽的一级结构予以鉴定。研究其对具体结果如下:1.以不同采收期坛紫菜为原料,测定其基本营养成分、氨基酸、脂肪酸和无机元素,并对营养价值进行了评价。结果表明,坛紫菜蛋白质... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 引言
    1.2 抗氧化肽的分离纯化
        1.2.1 大孔吸附树脂法
        1.2.2 膜分离法
        1.2.3 色谱法
    1.3 结构鉴定
        1.3.1 质谱分析
        1.3.2 核磁共振
        1.3.3 氨基酸组成与序列分析
    1.4 作用机理
    1.5 抗氧化肽的应用
        1.5.1 食品添加剂
        1.5.2 保健食品与药品
    1.6 立题依据和研究内容
        1.6.1 立题依据
        1.6.2 研究内容
第二章 汕头地区不同采收期坛紫菜营养成分分析与品质评价
    2.1 引言
    2.2 材料方法
        2.2.1 材料与试剂
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 实验方法
            2.2.3.1 基本营养成分的测定
            2.2.3.2 氨基酸分析
            2.2.3.3 脂肪酸分析
            2.2.3.4 无机元素含量测定
            2.2.3.5 营养价值评价
        2.2.4 数据处理
    2.3 结果与分析
        2.3.1 基本营养成分分析
        2.3.2 氨基酸组成分析
        2.3.3 氨基酸营养价值评价
        2.3.4 脂肪酸组成分析
        2.3.5 无机元素分析
    2.4 本章小结
第三章 超声波辅助提取坛紫菜蛋白及其基础特性研究
    3.1 引言
    3.2 材料方法
        3.2.1 材料与试剂
        3.2.2 实验仪器
        3.2.3 实验方法
            3.2.3.1 工艺流程
            3.2.3.2 单因素试验设计
            3.2.3.3 响应面试验工艺优化
            3.2.3.4 等电点（isoelectric point,pI）的测定
            3.2.3.5 紫外-可见分光光度计测定
            3.2.3.6 蛋白质分子质量的测定
            3.2.3.7 氨基酸分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 单因素试验
            3.3.1.1 料液比对蛋白质提取率的影响
            3.3.1.2 超声功率对蛋白质提取率的影响
            3.3.1.3 超声发出时间对蛋白质提取率的影响
            3.3.1.4 超声全程时间对蛋白质提取率的影响
        3.3.2 响应面分析
            3.3.2.1 数学模型的建立与显著性分析
            3.3.2.2 因素间交互作用影响结果
        3.3.3 坛紫菜蛋白基础特性分析
            3.3.3.1 等电点分析
            3.3.3.2 紫外光谱分析
            3.3.3.3 蛋白质分子质量组成分析
            3.3.3.4 氨基酸组成分析
    3.4 本章小结
第四章 末水坛紫菜蛋白酶解条件优化及酶解产物体外抗氧化活性
    4.1 引言
    4.2 材料方法
        4.2.1 材料与试剂
        4.2.2 实验仪器
        4.2.3 实验方法
            4.2.3.1 末水坛紫菜蛋白的制备
            4.2.3.2 末水坛紫菜蛋白酶解工艺流程
            4.2.3.3 末水坛紫菜蛋白水解蛋白酶的选择
            4.2.3.4 酸性蛋白酶水解末水坛紫菜蛋白的试验设计
            4.2.3.5 酶解产物DH与抗氧化活性关系
            4.2.3.6 酶解产物DH的测定
            4.2.3.7 酶解产物抗氧化活性测定
    4.3 结果与分析
        4.3.1 末水坛紫菜蛋白水解蛋白酶的选择
        4.3.2 单因素试验
            4.3.2.1 底物浓度对酸性蛋白酶水解末水坛紫菜蛋白DH的影响
            4.3.2.2 加酶量对酸性蛋白酶水解末水坛紫菜蛋白DH的影响
            4.3.2.3 PH值对酸性蛋白酶水解末水坛紫菜蛋白DH的影响
            4.3.2.4 温度对酸性蛋白酶水解末水坛紫菜蛋白DH的影响
        4.3.3 响应面分析
            4.3.3.1 数学模型的建立与显著性分析
            4.3.3.2 因素间交互作用影响结果
        4.3.4 DH与抗氧化活性关系
    4.4 本章小结
第五章 酶解产物分离纯化以及对HEPG2 人肝癌细胞氧化应激损伤的保护作用
    5.1 引言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 材料与试剂
        5.2.2 实验仪器
        5.2.3 实验方法
            5.2.3.1 末水坛紫菜多肽（粗品）的制备
            5.2.3.2 高效分子排阻色谱
            5.2.3.3 凝胶色谱层析
            5.2.3.4 结构鉴定
            5.2.3.5 细胞培养
            5.2.3.6 细胞模型的建立
            5.2.3.7 末水坛紫菜抗氧化肽对H2O2 诱导HEPG2 细胞氧化损伤的作用
            5.2.3.8 细胞活力、SOD酶活和MDA含量的测定
    5.3 结果与分析
        5.3.1 酶解产物分子量分布
        5.3.2 酶解产物的分离纯化
        5.3.3 酶解产物的结构鉴定
        5.3.4 细胞抗氧化活性
            5.3.4.1 细胞模型的建立
            5.3.4.2 细胞活力的测定
            5.3.4.3 细胞中SOD酶活和MDA含量的测定
    5.4 本章小结
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
创新点
参考文献
致谢
攻读硕士期间论文成果



本文编号：3015658