硫酸酯化金针菇多糖的抗氧化、抗衰老活性分析
发布时间：2021-12-23 02:31
金针菇（Flammulina velutipes）富含多糖、蛋白质、矿质元素、维生素等多种营养成分,具有免疫调节、抗疲劳、降胆固醇、抗肿瘤等生物活性。本课题利用Plackett-Burman designs（PB）和响应面分析（Response surface methodology,RSM）设计优化了金针菇多糖（F.velutipes polysaccharides,FPS）的提取条件,经硫酸酯化修饰后得到硫酸酯化FPS（Sulfated FPS,SFPS）,分析了SFPS和FPS的结构及体外抗氧化能力,检测了SFPS在D-半乳糖（D-galactose,D-gal）诱导的衰老模型小鼠中抗衰老和器官保护作用。主要结果如下:（1）FPS提取条件优化。在提取温度86.77℃,提取时间2.30h和乙醇倍数3.40条件下,FPS的理论得率为3.69%。为操作方便,提取条件设定为提取温度为87℃,提取时间2.5h和乙醇倍数3倍,FPS的理论得率为3.64%,实际验证得率为3.55±0.12%。（2）SFPS和FPS的结构分析。高效凝胶渗透色谱（High performance gel perm...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
葡萄糖标准曲线
山东农业大学硕士专业学位论文17子水中，4℃透析过夜，次日更换去离子水，透析3-4d，最后经浓缩和真空冷冻干燥得到纯化的FPS。2.4.5FPS的硫酸酯化修饰硫酸酯化金针菇子实体多糖采用氯磺酸-吡啶法（赵冠华等，2017）进行制备。首先在烧瓶中加入120mL吡啶，冰水浴中搅拌均匀，在80min内将20mL氯磺酸缓慢逐滴加入，提前制得酯化试剂以备下一步试验。酯化过程：将4g纯化好的金针菇子实体多糖溶解于80mL的N,N-二甲基甲酰胺中，充分搅拌后缓慢加入到盛有酯化试剂的烧瓶中。60℃水浴，搅拌2h。待反应结束后冷却至室温，用20%的氢氧化钠溶液调至pH中性，之后将其与95%乙醇以体积比为1:3的比例混合，4℃醇沉过夜，后经5000r/min离心10min，收集沉淀。将沉淀溶于适量的去离子水中，透析4-5d，最后将多糖溶液真空冷冻干燥得到硫酸酯化金针菇子实体多糖（SulfatedF.velutipespolysaccharides，SFPS）。2.4.6SFPS取代度的测定多糖中硫酸根含量的测定采用氯化钡-明胶法（Wangetal.,1999）。首先配制8%的三氯乙酸溶液，0.5%的氯化钡-明胶溶液和0.6mg/mL的硫酸基标准溶液待用。硫酸根标准曲线的绘制：分别吸取0.02mL、0.06mL、0.10mL、0.14mL、0.18mL、0.20mL硫酸基标准液于试管中，加入1mol/LHCl补足至0.5mL，然后加入3.5mLTCA（8%）和1.0mL氯化钡-明胶溶液，充分混合，室温静置20min，在波长360nm下测定吸光值A1，同样取6支试管，将上述1mL氯化钡-明胶溶液替换成1mL明胶溶液，其它步骤同上，测得吸光值A2，以A1-A2值为纵坐标，硫酸基含量为横坐标绘制标准曲线。如图2，回归方程y=0.001x+0.0047，R2=0.9964，该标准曲线符合要求。图2硫含量标准曲线Fig.2ThestandcurveofSO42-
硫酸酯化金针菇多糖的抗氧化、抗衰老活性分析26重要参数，其次是乙醇倍数和提取时间。在本课题中，优化的目的是找到能够提供FPS最大提取率的条件。回归模型的三维响应面用于解释自变量的影响和自变量之间对响应变量的交互影响。在本研究中响应曲面图和等高线图是使用DesignExpert7.0软件处理得到如图3至图5所示。图3提取时间与提取温度对于FPS提取率交互作用影响的响应面图（A）和等高线图（B）Fig.3Responsesurfaceplot(A)andcontourplot(B)oftheeffectofextractiontimeandextractiontemperatureonFPSextractionyield图3反映了提取温度与提取时间之间的交互作用。由方差分析表的P值（P=0.1719）分析得出提取温度和提取时间之间的交互作用较弱，提取时间对应的曲面平缓，当把提取时间固定在2h时，随着提取温度的增加，在75~95℃范围内多糖提取率呈现出先增加后减少的趋势，在87℃左右达到最大值。通常较高的提取温度和较长的提取时间可以提高子实体多糖得率。然而，分析原因可能是提取温度太高可能导致多糖的结构破坏，过长的提取时间可能使子实体中其它成分析出，从而降低多糖得率。图4乙醇倍数与提取温度对于FPS提取率交互作用影响的响应面图（A）和等高线图（B）Fig.4Responsesurfaceplot(A)andcontourplot(B)oftheeffectofmultipleofethanolandextractiontemperatureonFPSextractionyield图4反映了提取温度与乙醇倍数的交互作用对于FPS的提取得率没有显著影响（P=0.2172），在提取温度75℃到85℃左右，乙醇倍数为2到3.5倍时，子实体多糖得率增加，但提取温度超过85℃、乙醇倍数超过3.5倍时，多糖得率没有进一步提高。提
本文编号：3547599
【文章来源】：山东农业大学山东省
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
葡萄糖标准曲线
山东农业大学硕士专业学位论文17子水中，4℃透析过夜，次日更换去离子水，透析3-4d，最后经浓缩和真空冷冻干燥得到纯化的FPS。2.4.5FPS的硫酸酯化修饰硫酸酯化金针菇子实体多糖采用氯磺酸-吡啶法（赵冠华等，2017）进行制备。首先在烧瓶中加入120mL吡啶，冰水浴中搅拌均匀，在80min内将20mL氯磺酸缓慢逐滴加入，提前制得酯化试剂以备下一步试验。酯化过程：将4g纯化好的金针菇子实体多糖溶解于80mL的N,N-二甲基甲酰胺中，充分搅拌后缓慢加入到盛有酯化试剂的烧瓶中。60℃水浴，搅拌2h。待反应结束后冷却至室温，用20%的氢氧化钠溶液调至pH中性，之后将其与95%乙醇以体积比为1:3的比例混合，4℃醇沉过夜，后经5000r/min离心10min，收集沉淀。将沉淀溶于适量的去离子水中，透析4-5d，最后将多糖溶液真空冷冻干燥得到硫酸酯化金针菇子实体多糖（SulfatedF.velutipespolysaccharides，SFPS）。2.4.6SFPS取代度的测定多糖中硫酸根含量的测定采用氯化钡-明胶法（Wangetal.,1999）。首先配制8%的三氯乙酸溶液，0.5%的氯化钡-明胶溶液和0.6mg/mL的硫酸基标准溶液待用。硫酸根标准曲线的绘制：分别吸取0.02mL、0.06mL、0.10mL、0.14mL、0.18mL、0.20mL硫酸基标准液于试管中，加入1mol/LHCl补足至0.5mL，然后加入3.5mLTCA（8%）和1.0mL氯化钡-明胶溶液，充分混合，室温静置20min，在波长360nm下测定吸光值A1，同样取6支试管，将上述1mL氯化钡-明胶溶液替换成1mL明胶溶液，其它步骤同上，测得吸光值A2，以A1-A2值为纵坐标，硫酸基含量为横坐标绘制标准曲线。如图2，回归方程y=0.001x+0.0047，R2=0.9964，该标准曲线符合要求。图2硫含量标准曲线Fig.2ThestandcurveofSO42-
硫酸酯化金针菇多糖的抗氧化、抗衰老活性分析26重要参数，其次是乙醇倍数和提取时间。在本课题中，优化的目的是找到能够提供FPS最大提取率的条件。回归模型的三维响应面用于解释自变量的影响和自变量之间对响应变量的交互影响。在本研究中响应曲面图和等高线图是使用DesignExpert7.0软件处理得到如图3至图5所示。图3提取时间与提取温度对于FPS提取率交互作用影响的响应面图（A）和等高线图（B）Fig.3Responsesurfaceplot(A)andcontourplot(B)oftheeffectofextractiontimeandextractiontemperatureonFPSextractionyield图3反映了提取温度与提取时间之间的交互作用。由方差分析表的P值（P=0.1719）分析得出提取温度和提取时间之间的交互作用较弱，提取时间对应的曲面平缓，当把提取时间固定在2h时，随着提取温度的增加，在75~95℃范围内多糖提取率呈现出先增加后减少的趋势，在87℃左右达到最大值。通常较高的提取温度和较长的提取时间可以提高子实体多糖得率。然而，分析原因可能是提取温度太高可能导致多糖的结构破坏，过长的提取时间可能使子实体中其它成分析出，从而降低多糖得率。图4乙醇倍数与提取温度对于FPS提取率交互作用影响的响应面图（A）和等高线图（B）Fig.4Responsesurfaceplot(A)andcontourplot(B)oftheeffectofmultipleofethanolandextractiontemperatureonFPSextractionyield图4反映了提取温度与乙醇倍数的交互作用对于FPS的提取得率没有显著影响（P=0.2172），在提取温度75℃到85℃左右，乙醇倍数为2到3.5倍时，子实体多糖得率增加，但提取温度超过85℃、乙醇倍数超过3.5倍时，多糖得率没有进一步提高。提
本文编号：3547599
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