纳米微球固定化酶制备鱼皮胶原多肽及其抗氧化活性研究
发布时间：2023-02-18 21:07
鱼皮胶原多肽是鱼皮胶原蛋白经过水解工艺制备得到的具有一定生理活性的小分子物质,近年来作为一种新兴的功能性食品原料在国内外开始盛行。蛋白酶水解法是制备鱼皮胶原肽的重要方法,然而在实际应用时,存在酶解条件高、酶回收困难、生产成本高等问题。同时,鱼皮胶原多肽是优质的抗氧化原料,但制备过程复杂繁琐、耗时,这限制了其在食品工业中的应用。本论文通过纳米磺化聚苯乙烯微球(SPSNs)固定化枯草芽孢杆菌蛋白酶(Subtilisin,SU),研究了固定化酶过程的影响因素;利用制备的固定化酶水解罗非鱼鱼皮胶原,获得体外抗氧化性良好的胶原多肽;在解析产物多肽序列的基础上,利用分子对接技术实现了高通量筛选并验证了代表性功能肽的体外抗氧化活性。本论文的主要研究内容和结果如下:(1)枯草杆菌蛋白酶催化活性与分子结构特点的研究。借助于等温量热滴定技术(ITC),可知枯草杆菌蛋白酶对鱼皮胶原蛋白的催化水解活性优于牛血红蛋白和牛血清白蛋白。通过对枯草杆菌蛋白酶生物信息的详细分析,结果表明枯草杆菌蛋白酶为碱性蛋白,等电点为8.66,在pH小于7的溶液中表现为带正电,易于与带有负电的物质发生静电吸附。此外,其活性位点为由天...
【文章页数】：102 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRCT
第一章 绪论
1.1 鱼皮胶原多肽的研究现状
1.1.1 鱼皮胶原的综合利用
1.1.2 鱼皮胶原多肽的生物活性
1.1.3 鱼皮胶原多肽的制备
1.2 固定化酶技术的研究概况
1.2.1 固定化酶的方法
1.2.2 固定化酶的载体
1.2.3 固定化酶的应用
1.3 分子对接技术在抗氧化活性物质研究中的应用
1.3.1 分子对接技术
1.3.2 抗氧化机制
1.3.3 基于分子对接技术筛选抗氧化活性成分的研究进展
1.4 研究意义及研究内容
1.4.1 研究意义
1.4.2 研究内容及技术路线
第二章 枯草杆菌蛋白酶的催化活性及分子结构
2.1 前言
2.2 实验材料与设备
2.2.1 实验材料与试剂
2.2.2 实验仪器与设备
2.3 实验方法
2.3.1 枯草杆菌蛋白酶与底物相互作用的研究
2.3.2 枯草杆菌蛋白酶分子结构分析
2.4 结果与分析
2.4.1 ITC法测定枯草杆菌蛋白酶与底物的结合特性
2.4.2 ITC法测定枯草杆菌蛋白酶动力学特性
2.4.3 枯草杆菌蛋白酶分子的一级结构分析
2.4.4 枯草杆菌蛋白酶分子的二级结构分析
2.4.5 枯草杆菌蛋白酶序列的特征领域分析
2.4.6 枯草杆菌蛋白酶的三级结构分析
2.5 本章小结
第三章 SPSNs固定化枯草杆菌蛋白酶的制备及酶学特性研究
3.1 前言
3.2 实验材料与设备
3.2.1 实验材料与试剂
3.2.2 实验仪器与设备
3.3 实验方法
3.3.1 SPSNs的制备
3.3.2 SPSNs磺化度的测定
3.3.3 SPSU固定化酶的制备
3.3.4 SPSNs与固定化酶微球的表征
3.3.5 游离酶与固定化酶的酶学特性研究
3.4 结果与分析
3.4.1 SPSNs磺化度
3.4.2 SPSU固定化酶的制备
3.4.3 SPSNs与固定化酶微球的表征
3.4.4 游离酶与固定化酶的最适pH值
3.4.5 游离酶与固定化酶的最适温度
3.4.6 固定化酶的重复使用性
3.5 本章小结
第四章 固定化酶制备鱼皮胶原多肽及基于分子对接技术筛选抗氧化活性肽的研究
4.1 前言
4.2 实验材料与设备
4.2.1 实验材料与试剂
4.2.2 实验仪器与设备
4.3 实验方法
4.3.1 鱼皮胶原水解液的制备
4.3.2 多肽含量测定
4.3.3 抗氧化活性测定
4.3.4 鱼皮胶原多肽序列质谱分析
4.3.5 基于分子对接筛选抗氧化活性肽的研究
4.3.6 抗氧化活性肽分子对接结果活性验证
4.4 实验结果
4.4.1 鱼皮胶原水解液多肽含量测定
4.4.2 鱼皮胶原水解液中多肽的抗氧化活性测定
4.4.3 鱼皮胶原水解液多肽序列分析
4.4.4 鱼皮胶原水解液多肽分子对接
4.4.5 抗氧化活性肽分子对接结果活性验证
4.4.6 抗氧化活性肽分子对接的可视化分析
4.5 本章小结
结论和展望
一、结论
二、研究创新点
三、展望
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
附件
本文编号：3745534
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【学位级别】：硕士
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摘要
ABSTRCT
第一章 绪论
1.1 鱼皮胶原多肽的研究现状
1.1.1 鱼皮胶原的综合利用
1.1.2 鱼皮胶原多肽的生物活性
1.1.3 鱼皮胶原多肽的制备
1.2 固定化酶技术的研究概况
1.2.1 固定化酶的方法
1.2.2 固定化酶的载体
1.2.3 固定化酶的应用
1.3 分子对接技术在抗氧化活性物质研究中的应用
1.3.1 分子对接技术
1.3.2 抗氧化机制
1.3.3 基于分子对接技术筛选抗氧化活性成分的研究进展
1.4 研究意义及研究内容
1.4.1 研究意义
1.4.2 研究内容及技术路线
第二章 枯草杆菌蛋白酶的催化活性及分子结构
2.1 前言
2.2 实验材料与设备
2.2.1 实验材料与试剂
2.2.2 实验仪器与设备
2.3 实验方法
2.3.1 枯草杆菌蛋白酶与底物相互作用的研究
2.3.2 枯草杆菌蛋白酶分子结构分析
2.4 结果与分析
2.4.1 ITC法测定枯草杆菌蛋白酶与底物的结合特性
2.4.2 ITC法测定枯草杆菌蛋白酶动力学特性
2.4.3 枯草杆菌蛋白酶分子的一级结构分析
2.4.4 枯草杆菌蛋白酶分子的二级结构分析
2.4.5 枯草杆菌蛋白酶序列的特征领域分析
2.4.6 枯草杆菌蛋白酶的三级结构分析
2.5 本章小结
第三章 SPSNs固定化枯草杆菌蛋白酶的制备及酶学特性研究
3.1 前言
3.2 实验材料与设备
3.2.1 实验材料与试剂
3.2.2 实验仪器与设备
3.3 实验方法
3.3.1 SPSNs的制备
3.3.2 SPSNs磺化度的测定
3.3.3 SPSU固定化酶的制备
3.3.4 SPSNs与固定化酶微球的表征
3.3.5 游离酶与固定化酶的酶学特性研究
3.4 结果与分析
3.4.1 SPSNs磺化度
3.4.2 SPSU固定化酶的制备
3.4.3 SPSNs与固定化酶微球的表征
3.4.4 游离酶与固定化酶的最适pH值
3.4.5 游离酶与固定化酶的最适温度
3.4.6 固定化酶的重复使用性
3.5 本章小结
第四章 固定化酶制备鱼皮胶原多肽及基于分子对接技术筛选抗氧化活性肽的研究
4.1 前言
4.2 实验材料与设备
4.2.1 实验材料与试剂
4.2.2 实验仪器与设备
4.3 实验方法
4.3.1 鱼皮胶原水解液的制备
4.3.2 多肽含量测定
4.3.3 抗氧化活性测定
4.3.4 鱼皮胶原多肽序列质谱分析
4.3.5 基于分子对接筛选抗氧化活性肽的研究
4.3.6 抗氧化活性肽分子对接结果活性验证
4.4 实验结果
4.4.1 鱼皮胶原水解液多肽含量测定
4.4.2 鱼皮胶原水解液中多肽的抗氧化活性测定
4.4.3 鱼皮胶原水解液多肽序列分析
4.4.4 鱼皮胶原水解液多肽分子对接
4.4.5 抗氧化活性肽分子对接结果活性验证
4.4.6 抗氧化活性肽分子对接的可视化分析
4.5 本章小结
结论和展望
一、结论
二、研究创新点
三、展望
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
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