鼠伤寒沙门氏菌菌毛蛋白FimA特异性适配体及多克隆抗体的制备研究

发布时间：2020-04-11 06:15

【摘要】：鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)是一种人畜共患病肠道致病细菌,可引起肠胃炎、伤寒、痢疾等疾病。由鼠伤寒沙门氏菌引起的病例全球可见,分布广泛,特别是在贫困地区,由其感染造成的发病率和死亡率更是高居不下,给人类生活健康造成极大威胁,而形成细菌菌膜是其感染难以根除的主要原因之一。菌毛是细菌表面的一些丝状附属物,其在病原菌感染机体形成菌膜的初始黏附,菌膜发展甚至细菌间的信号传递等过程中均有重要作用。适配体是能与靶标特异性结合的寡核酸片段,其在靶向给药治疗细菌或细菌菌膜感染等方面有极大应用前景,因此,本文以鼠伤寒沙门氏菌菌毛蛋白为靶标,筛选其特异性适配体,为靶向治疗细菌或细菌菌膜感染奠定基础。此外,为进一步探究菌毛影响菌膜发展的分子机制,以菌毛蛋白为抗原,制备其多克隆抗体。具体工作如下:(1)FimA蛋白是鼠伤寒沙门氏菌Ⅰ型菌毛的主要结构单位,对实现其菌毛的功能有重要意义。本实验通过构建pET-28a-fimA重组质粒,将重组质粒导入表达细菌,并成功诱导表达。经纯化浓缩,得到纯度较高的重组蛋白FimA,用Bradford法测得其浓度为1.594 mg/mL,达到后续实验要求。(2)适配体(Aptamer)是经指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选得到的,与靶标具有高亲和力与特异性结合能力的寡核酸片段。本部分以鼠伤寒沙门氏菌菌毛蛋白FimA为靶标,筛选得到其特异性适配体。经验证分析,筛选得到的适配体对靶标菌具有较强的亲和力,达到29.8±7.88 nM,且具有较好的特异性。(3)本部分以纯化的鼠伤寒沙门氏菌菌毛蛋白FimA为抗原,免疫3只小鼠,得到其多克隆抗体。经间接酶联免疫吸附(ELISA)实验测其抗血清效价,其中两只小鼠抗血清效价达到1:64000,另一只小鼠抗血清效价达到1:32000。此外,用Western blot检验其特异性,结果表明,多克隆抗体特异性较好。
【图文】：

人畜共患病,适配体,菌毛蛋白,生条

门氏菌菌毛蛋白 FimA 特异性适配体及多克隆抗体的制备第一章引言和文献综述门氏菌氏菌（S. typhimurium）是一种人畜共患病肠道致病。它在自然界中分布广泛，在全球范围内均有其踪强，传播迅速，主要通过水和食物等途径进行传播生条件差，由 S. typhimurium 引起的感染尤为严重，

原子力显微镜,成像,菌毛

图 1-2 细菌菌毛原子力显微镜成像[21]Fig.1-2 Atomic force microscopy image of bacterial pi拷贝的主要亚单位蛋白和一些功能各异的低拷贝亚单位通过有序的合成组装，最终形成具有一定对细菌与定植表面的黏附，，菌膜形成等均有重要murium 菌毛 S. typhimurium 菌毛研究比较多的为Ⅰ型菌毛能产生Ⅰ型菌毛，Ⅰ型菌毛是由 fim 基因决定簇编为重要，构成菌毛的主体部分[25]，而 FimH 蛋白位附素蛋白[26]，另外 FimZ，FimW，FimD 等菌毛9]。正是由于各种菌毛蛋白亚基之间的精妙组装与
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：Q93

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