BDNF和NOS在扬子鳄眼球中的定位和表达分析

发布时间：2020-04-13 02:40

【摘要】：目的:本研究以安徽省扬子鳄(Alligator sinensis)繁殖研究中心提供扬子鳄眼球为研究对象,通过免疫组织化学染色和免疫荧光染色分析并观察一氧化氮合酶(NOS)和脑源性神经营养因子(BDNF)在扬子鳄眼球中的表达及分布情况,从而为后续探讨BDNF和NOS在扬子鳄视觉形成中的作用提供实验基础。方法:查询NCBI GenBank公共数据库中的人(accession no:NP_000616.3)、家兔(accession no:AAB68663.1)、非洲爪蟾(accession no:AAD55136.2)、斑马鱼(accession no:NP_571735.1)的NOS和以及人(accession no:CAA62632.1),家兔(accession no:XP_017201122.1),非洲爪蟾(accession no:AAH82887.1),斑马鱼(accession no:AAH66468.1)的BDNF蛋白氨基酸序列,利用MEGA软件对NOS和BDNF的氨基酸序列进行序列同源性比对和分析。取新鲜的鳄鱼眼球并立即用4%多聚甲醛固定,剔除周围的结缔组织,OCT包埋后进行冰冻切片,切片厚度为6μm。将切片在室温晾置20 min后,PBST漂洗三次,每次10 min,在组织周围用免疫组化笔画圈后滴加H_2O_2封闭30 min,然后滴加一抗(稀释比例分别为兔抗BDNF抗体为1:200,鼠抗nNOS抗体为1:200),置于湿盒内于4℃孵育过夜。次日将片子取出,PBST洗3次,每次10min。分别滴加HRP标记的羊抗兔IgG抗体和HRP标记的兔抗鼠IgG抗体,室温孵育1小时,PBST洗3次,每次10min,DAB显色液显色后,光镜下观察BDNF和nNOS在眼球中的表达;HE染色观察成年扬子鳄眼球切片的结构。将新鲜的鳄鱼眼球取出后立即用4%多聚甲醛固定,将周围结缔组织清除干净,OCT包埋后进行冰冻切片,切片厚度为6μm。将切片在室温晾置20 min后,PBST洗三次,每次10 min,在组织周围用免疫组化笔画圈后滴加入5%马血清封闭30 min后,分别滴加兔抗BDNF抗体(稀释比列为1:200)和鼠抗nNOS抗体(稀释比列为1:200)后,置于湿盒内于4℃冰箱孵育过夜。次日将片子取出,PBST洗3次,每次10min。滴加二抗(同时加入驴抗小鼠-594,驴抗兔-488,稀释比例均为1:1000),室温孵育2小时后,PBST洗3次,每次10min。滴加DAPI(1:1000)染核10 min后,PBST洗10min。甘油封片后于激光共聚焦显微镜拍照,观察NOS、BDNF在眼球中的分布情况。结果:通过生物学分析发现NOS和BDNF蛋白氨基酸序列在不同物种之间存在差异性,NOS蛋白氨基酸序列中,家兔和非洲爪蟾的同源性最高,为76.70%,其次为非洲爪蟾与斑马鱼的同源性74.02%;BDNF蛋白氨基酸序列中,人和非洲爪蟾的同源性最高,为85.48%,其次为人和家兔的同源性72.95%。HE染色可观察到扬子鳄眼球巩膜、脉络膜、视网膜结构清晰。免疫组织化学染色明显发现BDNF在扬子鳄眼球切片的脉络膜层和视网膜层表达,而NOS主要在视网膜层表达。免疫荧光染色发现BDNF和NOS在视网膜层共同表达,二者在视网膜层出现共存现象。结论:1.BDNF在扬子鳄眼球切片的脉络膜层和视网膜层表达,而NOS主要在视网膜层表达,二者在视网膜层共同表达并出现共存现象。2.BDNF和NOS在扬子鳄的眼球中均有表达且共存,可能参与扬子鳄视觉形成的调节。
【图文】：

观察到的扬子鳄眼球结构，蓝色、绿色和红色箭头依次指示为巩膜、脉络膜、视网膜；图 C和图 D在扬子鳄眼球的不同部位观察其结构。图3 扬子鳄眼球显微镜下结构图（40×和100×）3 观察 NOS 和 BDNF 在扬子鳄眼球中表达情况3.1免疫组化染色观察NOS和BDNF在扬子鳄眼球中的表达情况在不同倍镜下观察BDNF和NOS的免疫阳性表达的强度，结果显示NOS和BDNF在扬子鳄眼球中表达。图4A在不同倍镜下清晰观察到NOS阳性表达，图4B在不同倍镜下清晰观察到BDNF阳性表达。

图 4 NOS 和 BDNF 在扬子鳄眼球中的表达情况3.2 荧光染色观察NOS和BDNF在扬子鳄眼球中表达情况通过荧光染色观察NOS和BDNF在扬子鳄眼球中表达情况，图5A绿色为BDNF阳性，图5B红色为NOS阳性，，结果显示BDNF阳性表达在切片的中层和内层，高倍镜显示BDNF阳性细胞表达在脉络膜层和视网膜层，NOS阳性细胞主要表达在视网膜层。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：Q436

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李燕;;光学相干断层扫描仪应用于视网膜疾病检查中的护理配合[J];医疗装备;2017年10期

2 许凯;陈强;梁丽娜;;视网膜疾病眼局部给药研究进展[J];中国中医眼科杂志;2017年02期

3 刘安科;;对失明说拜拜[J];大科技(科学之谜);2016年12期

4 徐巍;郭健;徐国兴;;骨髓间充质干细胞在视网膜疾病研究中的应用[J];海峡科学;2010年05期

5 布娟;杨建军;李静;王乐今;金婉容;;川芎嗪对兔缺血性视网膜疾病的疗效[J];国际眼科杂志;2009年02期

6 陈鹏;视网膜疾病基因治疗的现状[J];国外医学.眼科学分册;2001年04期

7 ;视网膜疾病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2001年05期

8 ;视网膜疾病[J];国外科技资料目录.医药卫生;1998年12期

9 ;视网膜疾病[J];国外科技资料目录.医药卫生;1997年08期

10 白建伟,蔡用舒;特发性视网膜前膜二例[J];第四军医大学学报;1988年04期

相关会议论文 前10条

1 周晓芳;徐国兴;;干细胞应用于治疗视网膜疾病的研究进展[A];第十届全国中西医结合眼科学术会议暨第五届海峡眼科学术交流会论文汇编[C];2011年

2 张作明;;视网膜疾病模式动物资源及其应用[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

3 赵培泉;许宇;祝肇荣;;高速高分辨率的三维OCT-1000在视网膜疾病中的应用[A];中国眼底病论坛·全国眼底病专题学术研讨会论文汇编[C];2008年

4 刘静霞;;原发性视网膜色素变性的治疗难点与对策探析[A];第十届全国中西医结合眼科学术会议暨第五届海峡眼科学术交流会论文汇编[C];2011年

5 黄录;陈锋;;联合中药物理治疗对玻璃体视网膜疾病疗效的比较[A];第十次全省中、西医眼科学术交流会（暨吉安地区眼科专委会成立会议）学术论文集[C];2010年

6 陈芝清;;视网膜脉络膜疾病应用Anjio-OCT检查的优缺点体会分享[A];2016年浙江省眼科学学术年会论文汇编[C];2016年

7 宋宗明;潘琪琦;;无免疫缺陷疾病的巨细胞病毒性视网膜炎[A];中国眼底病论坛·全国眼底病专题学术研讨会论文汇编[C];2008年

8 郭承伟;吕璐;张勇;刘玲;朱晓林;田丽珍;;201303-28 LC-17滋阴降火法干预激光视网膜损伤的作用评价[A];“新成果·新进展·新突破”中华中医药学会2013年学术年会、第三次中华中医药科技成果论坛论文集[C];2013年

9 盛迅伦;;几种遗传性眼底病的鉴别诊断和研究进展[A];2014浙江省眼科学术年会论文汇编[C];2014年

10 郭长梅;马吉献;王雨生;王静波;;基质金属蛋白酶在体外RPE细胞创伤模型中的表达[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者 唐凤;人工智能平台高效诊断视网膜疾病[N];中国科学报;2018年

2 英文化;微型机器医生执行重大医疗任务[N];科技日报;2004年

3 记者 王璐 通讯员 屈慧莹;晚期糖尿病视网膜病变有望治愈[N];大众卫生报;2017年

4 闻声;英国：试验视网膜疾病基因疗法[N];中国医药报;2007年

5 姜海;科学家发现新的致盲基因[N];科技日报;2007年

6 廖联明;投资青睐哪些专科药公司素质[N];医药经济报;2019年

7 实习记者 寇彤 记者 苏文;下岗创业当劳模 致富不忘帮乡亲[N];雅安日报;2005年

8 封锡彬;警营,点亮患儿光明之灯[N];北方法制报;2007年

9 王珩　陈哲 本报记者 王富亮;人类健康的保护神——植物SOD[N];大众科技报;2009年

10 辛华;2002年度世界杰出女生物学家揭晓[N];健康报;2002年

相关博士学位论文 前10条

1 汪维华;视网膜图像分割算法研究[D];中国科学院大学(中国科学院重庆绿色智能技术研究院);2018年

2 魏宁;婴幼儿视觉异常综合治疗及斑马鱼视网膜发育相关多肽研究[D];南京医科大学;2019年

3 林雯;CNTF基因修饰的骨髓间充质干细胞对蓝光损伤视网膜的保护研究[D];福建医科大学;2018年

4 牛四杰;SD-OCT视网膜图像病变分析中的若干关键技术研究[D];南京理工大学;2016年

5 薛琅月;嗅鞘细胞联合视网膜前体细胞移植治疗视网膜变性疾病的临床前研究[D];第三军医大学;2017年

6 刘敬;整合素β1、αvβ3在脱离及复位兔视网膜中的表达变化[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年

7 王陆飞;骨髓间充质干细胞向视网膜样结构诱导分化的体外和体内研究[D];吉林大学;2004年

8 吴彤;促红细胞生成素对缺血导致视网膜神经节细胞损伤的保护作用及其机制[D];吉林大学;2006年

9 赵明威;自由基、活性氧在视网膜光损伤中的作用及机理研究[D];中国协和医科大学;1995年

10 郭斌;体外内层血视网膜屏障模型中紧密连接与细胞旁通透性变化研究[D];第四军医大学;2006年

相关硕士学位论文 前10条

1 于海琛;基于SE-Block的视网膜疾病分类方法研究[D];吉林大学;2019年

2 马森;低温对小鼠视网膜光损伤的保护作用研究[D];吉林大学;2019年

3 黄艳姣;BDNF和NOS在扬子鳄眼球中的定位和表达分析[D];皖南医学院;2019年

4 陈虹宇;使用眼底仿体标定视网膜血氧检测设备的基础研究[D];中国科学技术大学;2019年

5 吴云清;基于深度学习的糖尿病视网膜分类研究[D];哈尔滨理工大学;2019年

6 付天宇;视网膜相干光断层成像图像中的分层算法研究[D];武汉科技大学;2019年

7 李瑞萍;小鼠视网膜神经免疫系统的组织发生[D];河南大学;2018年

8 李杰;针刺调控NF-κB通路抑制视网膜小胶质细胞活性效应及机制研究[D];成都中医药大学;2018年

9 阮建祥;OCT测量正常人视网膜后极部平均厚度和黄斑区分层体积的影响因素研究[D];安徽医科大学;2018年

10 罗粟;基于生物视觉原理的视网膜OCT图像分割[D];南方医科大学;2018年

本文编号：2625485