耐福射奇球菌pprM基因对大肠杆菌抗氧化及抗辐射的影响

发布时间：2020-07-13 08:08

【摘要】：研究目的:pprM基因对耐辐射奇球菌(DR菌)的极端抗氧化和抗辐射能力有着十分重要的作用。本研究旨在探究外源性表达DR菌pprM基因能否提高大肠杆菌抗氧化和抗辐射能力,为研究pprM基因功能及构建高抗环境压力的大肠杆菌工程菌提供依据。研究方法:1、鉴定转耐辐射奇球菌pprM基因的大肠杆菌DH5ɑ,检测各型大肠杆菌对过氧化氢抵抗能力,研究pprM基因能否提高大肠杆菌DH5ɑ抗氧化能力。应用ROS、GSH、SOD、CAT检测试剂盒检测过氧化氢(5 mmol/L、10 mmol/L)处理后野生型大肠杆菌DH5ɑ、空质粒型大肠杆菌DH5ɑ以及转pprM基因大肠杆菌DH5ɑ体内自由基、各氧化酶含量或活性,研究pprM基因提高大肠杆菌抗氧化能力的可能机制。2、将pGEX-6p-1-pprM质粒、pGEX-6p-1质粒转化入大肠杆菌BL21,观察转pprM基因的大肠杆菌BL21在接受γ辐照后生长速度的变化,研究pprM基因能否提高大肠杆菌抗辐照能力。通过应用GSH、SOD、CAT检测试剂盒检测辐照(100Gy、200Gy)处理后野生型大肠杆菌BL21、空质粒型大肠杆菌BL21以及转pprM基因大肠杆菌BL21体内自由基、各氧化酶含量或活性,研究pprM基因提高大肠杆菌抗辐射能力的可能机制。3、检测过氧化氢处理后转pprM基因大肠杆菌BL21、空质粒型大肠杆菌BL21以及野生型大肠杆菌BL21红外光谱,研究pprM基因对大肠杆菌氧化应激相关官能团的变化。研究结果:1、比较野生型大肠杆菌DH5ɑ、空质粒型大肠杆菌DH5ɑ以及转pprM基因大肠杆菌DH5ɑ在过氧化氢抑菌圈实验中抑菌圈大小的差异,发现pprM基因转入大肠杆菌后能提高大肠杆菌抗过氧化氢的能力。在用过氧化氢处理后,与对照组相比,转入pprM基因的大肠杆菌体内ROS含量降低,而超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性升高,表明pprM基因在大肠杆菌体内可能是通过提高大肠杆菌抗氧化酶类的活性,清除其体内自由基而发挥其抗氧化功能。2、成功构建含pprM基因的大肠杆菌BL21。分别对辐照后野生型大肠杆菌BL21、空质粒型大肠杆菌BL21以及转pprM基因大肠杆菌BL21生长情况以及体内的SOD、GSH、CAT的量或活性分别进行了测定,检测发现在用γ辐照处理后,与对照组相比,转入pprM的大肠杆菌生长速度更快,体内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性升高,表明pprM在大肠杆菌体内可能可以通过提高大肠杆菌抗氧化酶类的活性,减少辐照对于大肠杆菌的氧化损伤。3、比较野生型大肠杆菌与转pprM基因大肠杆菌过氧化氢处理后的红外光谱图,发现转入pprM基因的大肠杆菌其氨基、羧基等活性基团在过氧化氢处理后峰值有所变化,说明pprM基因能对大肠杆菌这些基团产生改变。研究结论:1、耐辐射奇球菌pprM基团转入大肠杆菌能够提高大肠杆菌的抗氧化能力及抗辐射能力。2、pprM基团可通过提高大肠杆菌SOD、GSH、CAT等抗氧化酶类的活性发挥其抗氧化抗辐射功能。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：Q78
【图文】：

-1-pprM 质粒大肠杆菌 DH5ɑ 的鉴定在第 1 泳道有明显约为 400 bp 的目的条带 XhoI 对提取的质粒进行双酶切鉴定，如.4 kb 的两个条带，表明目的基因 pprM 后把双酶切鉴定为阳性的菌株其质粒寄 2.3 所示，利用 Blast 程序对所测得序列上结果表明 pprM 基因序列正确，说明所丢失无突变可以用于下一步实验。

pGEX-6p-1-pprM重组质粒双酶切鉴定结果

pGEX-6p-1-pprM质粒测序部分结果

【相似文献】

相关期刊论文 前1条

1 阳志;李伟;王五洲;贺俊彦;肖方竹;贺特;曹旭琴;马云;何淑雅;;耐辐射奇球菌pprM基因增强大肠杆菌氧化抗性的研究[J];现代生物医学进展;2019年03期

相关会议论文 前1条

1 杨杰;苏泽红;李斌元;马云;肖潇;范美婷;李伟;王秋岩;何淑雅;;耐辐射奇球菌pprM DNA结合域基因敲除株的构建[A];中国毒理学会第六届全国毒理学大会论文摘要[C];2013年

相关硕士学位论文 前3条

1 阳志;耐福射奇球菌pprM基因对大肠杆菌抗氧化及抗辐射的影响[D];南华大学;2019年

2 曾洋;耐辐射奇球菌pprM基因缺失对其类胡萝卜素合成及抗逆能力的影响[D];南华大学;2017年

3 杨杰;pprM及其DNA结合域基因敲除对耐辐射奇球菌辐射抗性影响[D];南华大学;2014年

本文编号：2753190