Bcl2l10基因在小鼠植入前胚胎发育过程中的作用

发布时间：2020-10-16 18:10

　　 母源因子是卵子发生过程中积累的mRNA,蛋白质和小RNA,参与调控精卵融合,染色质重塑和母源-合子转换等早期胚胎发育过程。本实验利用单细胞转录组数据筛选潜在母源基因,并从中选择一个基因进行敲低验证。Bcl2l10是抗凋亡基因,与卵母细胞成熟相关,可能参与小鼠早期胚胎发育。本实验利用RNAi技术进行敲低,研究其在早期胚胎中的作用。1)单细胞转录组数据的简单分析利用本实验室单细胞转录组数据,对卵母细胞-囊胚七个阶段体内胚进行数据分析。首先我们对42个已知母源基因进行了表达模式分析,根据其表达规律,从27238个差异基因中筛选出135个潜在的母源基因。最后,通过GO分析,从这些潜在母源基因中选择Bcl2l10开展深入研究。2)Bcl2l10在卵母细胞和早期胚胎中的表达分析通过定量PCR技术分析Bcl2l10在卵母细胞和早期胚胎中表达量,结果发现:在卵母细胞和原核胚胎中表达量最高,2-cell阶段降低,4-cell阶段表达量急剧下降,8-cell阶段几乎检测不到表达;通过免疫荧光技术分析其蛋白的定位,结果显示:Bcl2l10在卵母细胞、1-cell和2-cell阶段定位于细胞膜,后期转移到细胞质中表达。3)敲低Bcl2l10对小鼠植入前胚胎发育的影响在原核胚胎阶段进行显微注射,Bcl2l10 mRNA在2-cell阶段表达被抑制,而蛋白在8-cell阶段检测到被抑制。敲低Bcl2l10导致囊胚发育率降低,且具有显著性差异(P0.01)。同时,我们利用Morpholino进行敲低验证,得到一致的结果。上述结果显示,敲低Bcl2l10影响了囊胚发育。因此我们检测了囊胚标志基因Oct4、Cdx2、Nanog和Sox17。结果显示:内细胞团发育相关基因Oct4、Nanog和Sox17的表达都被显著性降低,表明Bcl2l10可能与内细胞团发育相关。由于Bcl-2家族与细胞凋亡相关,因此我们检测了凋亡相关基因Bax和Trp53的表达。结果显示:Bax的表达不受影响;而Trp53在囊胚阶段的表达下降。而敲低Bcl2l10之后,线粒体的活性降低。这表明,Bcl2l10参与线粒体凋亡途径,并影响Trp53的表达。综上,Bcl2l10具有母源基因特征,影响Oct4、Nanog和Sox17的表达,参与内细胞团的发育。这些结果表明,我们筛选的母源基因具有一定的可信性,将为哺乳动物早期胚胎发育研究提供新的候选基因。
【学位单位】：阜阳师范学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：Q953
【部分图文】：

哺乳动物MZT过程图

Boo序列比对[82]

已知母源基因热图
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本文编号：2843594