致病弧菌宽谱噬菌体的分离鉴定、生物特性和应用研究
发布时间：2020-12-13 08:56
致病弧菌是可引起人和水生生物共患病的一类病原性弧菌。弧菌的防治一般采用抗生素或化学制剂等,但随着耐药性菌株的出现,防控变得十分棘手,由此,噬菌体的应用重新出现在大众视野。本研究意在筛选对多种致病性弧菌具有高效裂解性的宽谱噬菌体,并应用此类噬菌体制备成新型生物抑菌剂,来控制水产品养殖和加工过程中致病性弧菌的繁殖和污染。（1）从海鱼、淡水鱼、贝类宰杀污血水样品中分离纯化得到27株弧菌噬菌体,6株弧菌噬菌体透射电镜下形态分别为短尾噬菌体科和肌尾噬菌体科两类。经裂解谱测定,得噬菌体VppYZU-Y1和噬菌体OY-1裂解谱最宽,在pH5.0～12.0条件下噬菌体的稳定性较好,属于耐碱不耐酸型;50℃～80℃条件下噬菌体活性逐步降低。对噬菌体进行最佳感染复数、一步生长曲线的测定,挑选得到出稳定性好,裂解能力强的噬菌体。（2）采用全基因组测序的方法测定噬菌体的基因信息。噬菌体OY-1的全基因组信息未找到同源噬菌体,判断该噬菌体为新噬菌体。噬菌体OY-1的基因组全长为43479 bp,其中编码基因总长度分别为38403 bp,平均长度分别为936.66 bp,占总长的88.33%,GC含量为49.26...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１弧菌噬菌体透射电镜照片??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈ?ｏｆ?Ｖｉｂｒｉｏ?ｐｈａｇｅｓ??
?２．３．４嗤菌体的ｐＨ稳定性??噬菌体ｐＨ稳定性结果如图２－２所示，在ｐＨ?５．０？９．０范围内，噬菌体效价较高，其裂??解活性均较为稳定和良好。噬菌体侵染宿主首先需要吸附，吸附作用受ｐＨ等条件影响，??进而影响到噬菌体对宿主的侵染［８４］；当ｐＨ值降低或升高时，噬菌体的裂解活性有所降低。??噬菌体ＯＹ－１、ＶｐｐＹＺＵ－Ｙ?１在ｐＨ＞１０．０的条件下仍保持较高的存活率（５４．９５％以上），具??有嗜碱特性；噬菌体〇丫－１在？只３．０几乎完全失活，属于耐碱不耐酸型；￥＾＾２１１－￥１在??酸性条件下，活性显著下降，但在碱性条件下稳定性较好，属于畏酸嗜碱型。??９?５?ｒ?－Ｂ－ｏｖ．，?Ａ?＿＿－ＶＰＰＹＺＵ－Ｙｌ?Ｂ??工?１０?＿?＿ｚ??Ｉ９－０－?／一！８＿?／??＾８－ｓ■?／?笔?４．??Ｉ?１?ｈ．?Ｉ??１?／?／■??２?４?６?８?１０?１２?２?４?６?８?１０?１２??ｐＨ?ｐＨ??图２－２弧菌噬菌体的ｐＨ稳定性??Ｆｉｇ．?２－２?ｐＨ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?Ｖｉｂｒｉｏ?ｐｈａｇｅｓ??注：Ａ为最小弧菌噬菌体ＯＹ－１；?Ｂ为副溶血性弧菌噬菌体ＶｐｐＹＺＵ－Ｙｌ??２．３．５?Ｐｆｅ国体的热稳定性??噬菌体热稳定性结果如图２－３所示，噬菌体ＯＹ－１经５０°Ｃ处理６０?ｍｉｎ后活性均基本没??有变化；在６０°Ｃ下作用６０?ｍｉｎ后
?ｉｔ??ｆ?—ｔ体纯化带??■ｄａ??图３－１噬菌体纯化结果??Ｆｉｇ．?３－１?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｐｈａｇｅ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ??３．３．２噬菌体ＤＮＡ样品检测??如图３－２所示，为噬菌体ＯＹ－１ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳图，电泳条带清晰完整，表示无??污染无降解，可以继续后续测第三代全基因组实验的要求。??Ｉ??图３－２噬菌体核酸鉴定??Ｆｉｇ．?３－２?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｇｅｎｏｍｅ?ｏｆ?ｐｈａｇｅｓ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ；泳道?１：?ＯＹ－１；??３．３．３噬菌体基因组概述??最小弧菌噬菌体ＯＹ－１基因组全长为４３４７９?ｂｐ，编码基因总长度分别为３８４０３?ｂｐ，平??均长度为９３６．６６?ｂｐ，占总长的８８．３３％，ＧＣ含量为４９．２６％，有４１个开放阅读框（ＯＲＦｓ）。??４１个ＯＲＦｓ编码蛋白中都可以在数据库中搜到同源性基因序列，其中２４个ＯＲＦｓ编码的??蛋白为假设蛋白，有１７个蛋白序列功能明确，基因组数据显示最小弧菌噬菌体ＯＹ－１为一??种新的噬菌体。基因组数据显示最小弧菌噬菌体ＯＹ－１为一种新的噬菌体？，分析表明最小??弧菌噬菌
【参考文献】：
期刊论文
[1]2018年前三季度渔业经济形势分析[J]. 小远. 渔业致富指南. 2018(22)
[2]鲭鱼罐头蒸煮液蛋白酶解产物的生物活性分析[J]. 林云,林娟,许鑫琦,毕丹丹,郭耀湘. 福州大学学报(自然科学版). 2018(04)
[3]一起副溶血弧菌感染食物中毒病原学检测[J]. 姜大栋,李琦. 中国现代药物应用. 2018(07)
[4]主成分分析法综合评价水产品营养价值[J]. 黄鸾玉,吴祥庆,庞燕飞,兰柳春,杨姝丽. 食品科技. 2018(02)
[5]水产品的营养价值与研究[J]. 王建红. 食品安全导刊. 2017(30)
[6]鱼类营养价值及品质的调控[J]. 胡宗福,乔凤军. 科学养鱼. 2017(08)
[7]8例创伤弧菌感染患者的护理[J]. 邓慧倍. 护理学报. 2017(08)
[8]肉及肉制品中的生物胺[J]. 王树庆,范维江,李成凤. 食品研究与开发. 2016(24)
[9]粪肠球菌噬菌体vB_E.faecalis_IME196的生物学特性及其全基因组分析[J]. 邢少贞,张湘莉兰,舒鹏,孙强,裴广倩,米志强,安小平,王景林,赵宝华,童贻刚. 微生物学通报. 2016(09)
[10]副溶血弧菌噬菌体qdvp001重组内溶素诱导表达以及理化性质初步研究[J]. 王伟宇,林洪,王静雪. 食品工业科技. 2016(16)
博士论文
[1]鲢鱼风味特征及热历史对鲢鱼风味的影响[D]. 刘敬科.华中农业大学 2009
硕士论文
[1]鸡源性大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及其抗菌性初步研究[D]. 冯方周.锦州医科大学 2017
[2]建立泉州市水产品质量安全可追溯体系的初步研究[D]. 吴琼.集美大学 2014
[3]噬菌体对食品中肠炎沙门氏菌污染的生物防控研究[D]. 张鹏禹.南京师范大学 2014
本文编号：2914282
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１弧菌噬菌体透射电镜照片??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈ?ｏｆ?Ｖｉｂｒｉｏ?ｐｈａｇｅｓ??
?２．３．４嗤菌体的ｐＨ稳定性??噬菌体ｐＨ稳定性结果如图２－２所示，在ｐＨ?５．０？９．０范围内，噬菌体效价较高，其裂??解活性均较为稳定和良好。噬菌体侵染宿主首先需要吸附，吸附作用受ｐＨ等条件影响，??进而影响到噬菌体对宿主的侵染［８４］；当ｐＨ值降低或升高时，噬菌体的裂解活性有所降低。??噬菌体ＯＹ－１、ＶｐｐＹＺＵ－Ｙ?１在ｐＨ＞１０．０的条件下仍保持较高的存活率（５４．９５％以上），具??有嗜碱特性；噬菌体〇丫－１在？只３．０几乎完全失活，属于耐碱不耐酸型；￥＾＾２１１－￥１在??酸性条件下，活性显著下降，但在碱性条件下稳定性较好，属于畏酸嗜碱型。??９?５?ｒ?－Ｂ－ｏｖ．，?Ａ?＿＿－ＶＰＰＹＺＵ－Ｙｌ?Ｂ??工?１０?＿?＿ｚ??Ｉ９－０－?／一！８＿?／??＾８－ｓ■?／?笔?４．??Ｉ?１?ｈ．?Ｉ??１?／?／■??２?４?６?８?１０?１２?２?４?６?８?１０?１２??ｐＨ?ｐＨ??图２－２弧菌噬菌体的ｐＨ稳定性??Ｆｉｇ．?２－２?ｐＨ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?Ｖｉｂｒｉｏ?ｐｈａｇｅｓ??注：Ａ为最小弧菌噬菌体ＯＹ－１；?Ｂ为副溶血性弧菌噬菌体ＶｐｐＹＺＵ－Ｙｌ??２．３．５?Ｐｆｅ国体的热稳定性??噬菌体热稳定性结果如图２－３所示，噬菌体ＯＹ－１经５０°Ｃ处理６０?ｍｉｎ后活性均基本没??有变化；在６０°Ｃ下作用６０?ｍｉｎ后
?ｉｔ??ｆ?—ｔ体纯化带??■ｄａ??图３－１噬菌体纯化结果??Ｆｉｇ．?３－１?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｐｈａｇｅ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ??３．３．２噬菌体ＤＮＡ样品检测??如图３－２所示，为噬菌体ＯＹ－１ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳图，电泳条带清晰完整，表示无??污染无降解，可以继续后续测第三代全基因组实验的要求。??Ｉ??图３－２噬菌体核酸鉴定??Ｆｉｇ．?３－２?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｇｅｎｏｍｅ?ｏｆ?ｐｈａｇｅｓ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ；泳道?１：?ＯＹ－１；??３．３．３噬菌体基因组概述??最小弧菌噬菌体ＯＹ－１基因组全长为４３４７９?ｂｐ，编码基因总长度分别为３８４０３?ｂｐ，平??均长度为９３６．６６?ｂｐ，占总长的８８．３３％，ＧＣ含量为４９．２６％，有４１个开放阅读框（ＯＲＦｓ）。??４１个ＯＲＦｓ编码蛋白中都可以在数据库中搜到同源性基因序列，其中２４个ＯＲＦｓ编码的??蛋白为假设蛋白，有１７个蛋白序列功能明确，基因组数据显示最小弧菌噬菌体ＯＹ－１为一??种新的噬菌体。基因组数据显示最小弧菌噬菌体ＯＹ－１为一种新的噬菌体？，分析表明最小??弧菌噬菌
【参考文献】：
期刊论文
[1]2018年前三季度渔业经济形势分析[J]. 小远. 渔业致富指南. 2018(22)
[2]鲭鱼罐头蒸煮液蛋白酶解产物的生物活性分析[J]. 林云,林娟,许鑫琦,毕丹丹,郭耀湘. 福州大学学报(自然科学版). 2018(04)
[3]一起副溶血弧菌感染食物中毒病原学检测[J]. 姜大栋,李琦. 中国现代药物应用. 2018(07)
[4]主成分分析法综合评价水产品营养价值[J]. 黄鸾玉,吴祥庆,庞燕飞,兰柳春,杨姝丽. 食品科技. 2018(02)
[5]水产品的营养价值与研究[J]. 王建红. 食品安全导刊. 2017(30)
[6]鱼类营养价值及品质的调控[J]. 胡宗福,乔凤军. 科学养鱼. 2017(08)
[7]8例创伤弧菌感染患者的护理[J]. 邓慧倍. 护理学报. 2017(08)
[8]肉及肉制品中的生物胺[J]. 王树庆,范维江,李成凤. 食品研究与开发. 2016(24)
[9]粪肠球菌噬菌体vB_E.faecalis_IME196的生物学特性及其全基因组分析[J]. 邢少贞,张湘莉兰,舒鹏,孙强,裴广倩,米志强,安小平,王景林,赵宝华,童贻刚. 微生物学通报. 2016(09)
[10]副溶血弧菌噬菌体qdvp001重组内溶素诱导表达以及理化性质初步研究[J]. 王伟宇,林洪,王静雪. 食品工业科技. 2016(16)
博士论文
[1]鲢鱼风味特征及热历史对鲢鱼风味的影响[D]. 刘敬科.华中农业大学 2009
硕士论文
[1]鸡源性大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及其抗菌性初步研究[D]. 冯方周.锦州医科大学 2017
[2]建立泉州市水产品质量安全可追溯体系的初步研究[D]. 吴琼.集美大学 2014
[3]噬菌体对食品中肠炎沙门氏菌污染的生物防控研究[D]. 张鹏禹.南京师范大学 2014
本文编号：2914282
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