转录因子AP2a在RNA聚合酶Ⅲ指导基因转录中的作用

发布时间：2020-12-20 11:04

　　AP2a（AP2α）是哺乳动物细胞内一种重要的转录因子,它能参与生物体细胞内多种生理生化活动。本课题前期的研究表明,FLNA能够抑制RNA聚合酶Ⅲ所指导的基因转录及其转录因子BRF1和TFⅢC2的表达;通过mRNA-seq分析发现,在SaOS2 FLNA敲低细胞中也明显增加AP2a mRNA的表达。通过检测AP2a的mRNA和蛋白水平,我们发现FLNA敲低的两组系（HeLa和SaOS2）确实能增加AP2a的表达。由于FLNA能同时抑制AP2a,BRF1,TFⅢC2及RNA聚合酶Ⅲ（Pol Ⅲ）基因的表达,AP2a是否也介导RNA聚合酶Ⅲ及其转录因子TFⅢC2和BRF1的基因转录并不清楚。因此,本研究以AP2a作为研究对象,探究其在Pol Ⅲ指导的基因转录中的作用及其机制。为了完成以上研究目标,我们建立了293T和Hela细胞AP2a shRNA稳定表达细胞系并利用这些细胞系研究AP2a对Pol Ⅲ及其转录因子BRF1和TFⅢC2表达的影响。结果表明,AP2a敲低能够显著降低Pol Ⅲ、BRF1和TFⅢC2基因表达水平,提示AP2a是Pol Ⅲ指导的基因转录所必需的。为了进一步确定这一发... 

【文章来源】：武汉科技大学湖北省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

SaOS2FLNA敲低细胞系和对照细胞系mRNA-seq分析证明FLNA敲低增强AP2amRNA的表达

图 3.2 FLNA 敲低对细胞系中 AP2a 表达的影响rl shRNA 或 FLNA shRNA 的 HeLa（A 和 B）、Saos2（C 和 D）a 的表达水平的变化。表达抑制 AP2a 的表达

3.3 FLNA 过表达对 HeLa 细胞系中 AP2a 表达的影响 过表达稳定细胞系中，用 RT-qPCR 和 Western blot 检测A over 表示 FLNA 过表达)。和 Ctrl 中 AP2a mRNA 的表达。和 Ctrl 中 AP2a 蛋白的表达。敲低显著抑制 Pol III、BRF1 和 TFIII FLNA 敲低增加 Pol III 基因转录以及 BRF1， T BRF1 和 TFIIIC2 启动子序列，两者都含有 AP2此我们推测，AP2a 可能参与 PoI III 基因表达或。为了证明这一假设，我们首先将构建好的 APontrol shRNA 表达载体瞬时转染 293T 细胞。36 Western blot 检测 Pol III、BRF1 和 TFIIIC2 基因表

【参考文献】：
期刊论文
[1]组蛋白甲基化促进AP2a基因表达及骨髓间充质干细胞成骨分化[J]. 马平,杜娟,范志朋.  北京口腔医学. 2013(06)

硕士论文
[1]细丝蛋白A介导的RNA聚合酶Ⅲ基因转录机制的研究[D]. 周颖.武汉科技大学 2018



本文编号：2927756