桂花ERF2转录因子在CCD1和CCD4基因表达调控中的作用研究

发布时间：2021-01-03 11:42

　　桂花（Osmanthus fragrans Lour）又名木犀、岩桂和九里香,是木犀科木犀属植物,原产我国,是特有的常绿阔叶灌木或小乔木经济树种,具有2500多年的栽培历史,是我国十大传统名花之一。桂花因具有丰富的颜色和独特的芳香,从古至今备受人们喜爱,而且在观赏、食品、药用和香料等方面具有广泛的应用价值。根据开花时期、花色花香等特征,桂花可以分为银桂品种群、四季桂品种群、金桂品种群、丹桂品种群和彩叶桂品种群。研究发现,桂花花瓣的颜色是由类胡萝卜素含量决定的,花瓣中类胡萝卜素的含量越高,花瓣的颜色越深。桂花花瓣类胡萝卜素裂解双加氧酶（carotenoid cleavage dioxygenase,CCD）CCD1和CCD4可以裂解类胡萝卜素产生芳香物质紫罗兰酮（包括α-紫罗兰酮和β-紫罗兰酮）,使桂花具有独特的香味。因此,CCD1和CCD4是桂花类胡萝卜素裂解和紫罗兰酮产生的关键基因。本研究利用分子生物学方法研究桂花ERF2转录因子对桂花CCD1和CCD4基因表达的调控,主要研究结果如下:（1）桂花ERF2基因克隆及CCD1、CCD4和ERF2基因的表达模式分析设计特异性引物扩增ERF... 

【文章来源】：河南大学河南省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 桂花的研究背景
    1.2 桂花花色与花香研究进展
    1.3 类胡萝卜素裂解双加氧酶CCD基因研究进展
    1.4 转录因子的简介及相关研究技术
        1.4.1 转录因子简介
        1.4.2 AP2/ERF转录因子简介
        1.4.3 ERF转录因子的结构
        1.4.4 ERF转录因子作用机制
        1.4.5 ERF转录因子的功能
    1.5 烟草瞬时转化技术
    1.6 EMSA技术
    1.7 本研究的目的与意义
第二章 桂花ERF2 基因的克隆及ERF2与CCD1和CCD4 基因的表达模式分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 实验仪器与试剂
        2.1.3 实验所需引物
    2.2 实验方法
        2.2.1 桂花花瓣RNA的提取
        2.2.2 RNA琼脂糖凝胶电泳检测
        2.2.3 RNA反转录
        2.2.4 桂花ERF2 基因的扩增
        2.2.5 目的片段的回收纯化
        2.2.6 桂花ERF2 基因与CCD1和CCD4 基因表达模式分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 ERF2 转录因子的序列分析
        2.3.2 不同花期银桂和丹桂花瓣CCD1、CCD4和ERF2 基因表达量分析
    2.4 讨论
第三章 Of ERF2 转录因子亚细胞定位
    3.1 实验材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 质粒载体与菌株
        3.1.3 实验仪器与药品试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 目的片段的扩增与回收
        3.2.2 35 S::OfERF2 超表达载体的构建
        3.2.3 35 S::OfERF2 超表达重组载体的检测、提取
        3.2.4 农杆菌感受态细胞的制备与转化
        3.2.5 烟草转化与亚细胞定位分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 35 S::OfERF2 重组载体的构建
        3.3.2 转化烟草的亚细胞定位分析
    3.4 讨论
第四章 桂花ERF2 基因在烟草叶片中超表达分析
    4.1 实验材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 质粒载体和菌株
        4.1.3 实验仪器与试剂药品
    4.2 实验方法
        4.2.1 目的基因的获得
        4.2.2 35 S::OfERF2 超表达重组载体的构建
        4.2.3 35 S::OfERF2 超表达重组载体的检测和提取
        4.2.4 制备农杆菌感受态细胞与转化
        4.2.5 烟草叶片的转化
        4.2.6 烟草叶片的超表达检测
    4.3 结果分析
    4.4 讨论
第五章 桂花ERF2 转录因子与CCD1和CCD4 基因启动子相互作用分析
    5.1 实验材料
        5.1.1 植物材料
        5.1.2 质粒载体与菌株
        5.1.3 实验试剂与仪器
        5.1.4 实验所用引物序列
    5.2 实验方法
        5.2.1 桂花花瓣DNA的提取
        5.2.2 目的基因的扩增、纯化和酶切
        5.2.3 CCD1pro::GUS和 CCD4pro::GUS重组质粒的构建
        5.2.4 CCD1pro::GUS和 CCD4pro::GUS靶质粒的鉴定与提取
        5.2.5 农杆菌感受态细胞的制备与转化
        5.2.6 35 S::OfERF2 超表达载体与CCD1pro::GUS和 CCD4pro::GUS靶质粒共转化
        5.2.7 烟草GUS染色
        5.2.8 共转化烟草叶片中GUS基因表达量检测
    5.3 结果与分析
        5.3.1 CCD1pro::GUS和 CCD4pro::GUS重组载体的构建
        5.3.2 35 S::OfERF2 超表达载体与CCD1pro::GUS和 CCD4pro::GUS靶质粒共转化以及GUS染色
        5.3.3 共转化烟草叶片中GUS基因表达量的检测
    5.4 讨论
第六章 Of ERF2 蛋白与CCD1和CCD4 基因启动子上相关元件的相互作用
    6.1 实验材料
        6.1.1 质粒载体与菌株
        6.1.2 实验仪器与试剂
        6.1.3 溶液配制
    6.2 实验方法
        6.2.1 ERF2 基因的扩增与纯化
        6.2.2 载体和目的片段酶切与连接
        6.2.3 重组质粒的转化与检测
        6.2.4 诱导目的蛋白的表达与检测
        6.2.5 目的蛋白的纯化
        6.2.6 EMSA 实验
    6.3 结果与分析
        6.3.1 目的蛋白的诱导表达与纯化
        6.3.2 EMSA 验证实验
    6.4 讨论
第七章 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]农杆菌渗入法介导的基因瞬时表达技术及应用[J]. 邱礽,陶刚,李奇科,邱又彬,刘作易.  分子植物育种. 2009(05)
[2]ERF类转录因子的结构与功能[J]. 葛宝宇,林轶,侯和胜.  安徽农学通报. 2007(20)
[3]中国桂花的研究历史、现状与桂花品种国际登录[J]. 臧德奎,向其柏,刘玉莲,郝日明.  植物资源与环境学报. 2003(04)
[4]南京地区桂花栽培品种调查研究[J]. 刘玉莲.  南京林业大学学报(自然科学版). 1985(01)



本文编号：2954922