紫萼玉簪HVCHS和HVANS基因的克隆及功能验证
发布时间：2021-01-06 05:29
玉簪（Hosta）是百合科玉簪属多年生的草本花卉,作为园林观赏植物和药用植物,应用极其普遍,过去玉簪多种植在我国江南地区,后被广泛引种栽培,现在在我国北方地区,玉簪已发展成为重要的耐阴露地花叶共赏型花卉。然而玉簪虽然栽培品种众多,但花色却很单一,只有白色和紫色两种花色,因此挖掘玉簪花色代谢基因,培育玉簪新花色品种尤为重要。形成植物花色的主要色素有甜菜碱、类胡萝卜色素、类黄酮,其中类黄酮是最广泛存在于植物中的色素。查尔酮合成酶是类黄酮生物合成途径中的关键酶,大量研究表明查尔酮合成酶及花青素合成酶对植物花色的形成起着至关重要的作用。本研究以紫萼玉簪（Hosta ventricosa）为材料,采用RT-PCR方法,克隆了紫萼玉簪CHS和ANS基因全长cDNA序列,命名为HVCHS和HVANS,大小分别为1176bp和1059bp,编码391和352个氨基酸,采用生物信息学方法预测HVCHS和HVANS基因的结构和功能,构建植物过表达载体pCAMBIA3301-HVCHS和pCAMBIA3301-HVANS,通过农杆菌介导法,将HVCHS和HVANS基因转化到烟草中,通过对转基因烟草植株的分子...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
花青素生物合成途径[31]
PCR 扩增 HVCHS 和 HVANS 基因的编码区序列（见图 2.1-B 和 2.2-A），在 1176bp 左右和1059bp 处可见明亮的单一条带。回收、纯化的目的基因与克隆载体 pMD-18T 连接，PCR初步验证克隆载体pMD-18T-HVCHS和pMD-18T-HVANS构建成功（见图2.1-C和2.2-B），阳性克隆载体质粒测序结果表明，克隆得到的 HVCHS 基因序列与玉簪转录组库中的 CHS基因的 CDS 序列（第 30bp~1205bp）同源性为 100%（见图 2.3），克隆得到的 HVANS 基因序列与玉簪转录组库中 ANS 基因序列（第 7bp-1065bp）同源性为 100%（见图 2.4），证明成功克隆了紫萼玉簪 HVCHS 基因和 HVANS 基因的编码区序列。
A：RNARNA ；A: RNAbuddinamp电泳检测图，B：PCR 扩pMD-18Telectrophoresng, early flowplification HVpMD，1~5：分别扩增 HVCHST-HVCHS 的Fig.2.1sis detection,wering, fμLl flVCHS gene, M18T-HVCHS图 2.1 紫萼别为绿苞期、基因电泳图PCR 鉴定，Cloning of H1~5: Total Rlowering stagM: DNA MarS , M: DNA M萼玉簪 HVCH紫绿间苞期，M：DNAM：DNA MHVCHS geneRNA from thegs of hosta verker DL 2000Marker DL 20HS 基因的克、紫苞期、初Marker DL 2Marker DL 200from Hosta Vgreen budingentricosa; B: E0, 1~4: HVCH000, 1~6: Rec克隆初花期、盛花2000，1~4：00，1~6：重Ventricosag, green and pElectrophoreHS gene；C:combinant pla花期的紫萼玉HVCHS 基因重组质粒；purple buddinsis detectionPCR detectioasmid.玉簪花瓣总因；C：ng, purpleof PCRon of
本文编号：2960013
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
花青素生物合成途径[31]
PCR 扩增 HVCHS 和 HVANS 基因的编码区序列（见图 2.1-B 和 2.2-A），在 1176bp 左右和1059bp 处可见明亮的单一条带。回收、纯化的目的基因与克隆载体 pMD-18T 连接，PCR初步验证克隆载体pMD-18T-HVCHS和pMD-18T-HVANS构建成功（见图2.1-C和2.2-B），阳性克隆载体质粒测序结果表明，克隆得到的 HVCHS 基因序列与玉簪转录组库中的 CHS基因的 CDS 序列（第 30bp~1205bp）同源性为 100%（见图 2.3），克隆得到的 HVANS 基因序列与玉簪转录组库中 ANS 基因序列（第 7bp-1065bp）同源性为 100%（见图 2.4），证明成功克隆了紫萼玉簪 HVCHS 基因和 HVANS 基因的编码区序列。
A：RNARNA ；A: RNAbuddinamp电泳检测图，B：PCR 扩pMD-18Telectrophoresng, early flowplification HVpMD，1~5：分别扩增 HVCHST-HVCHS 的Fig.2.1sis detection,wering, fμLl flVCHS gene, M18T-HVCHS图 2.1 紫萼别为绿苞期、基因电泳图PCR 鉴定，Cloning of H1~5: Total Rlowering stagM: DNA MarS , M: DNA M萼玉簪 HVCH紫绿间苞期，M：DNAM：DNA MHVCHS geneRNA from thegs of hosta verker DL 2000Marker DL 20HS 基因的克、紫苞期、初Marker DL 2Marker DL 200from Hosta Vgreen budingentricosa; B: E0, 1~4: HVCH000, 1~6: Rec克隆初花期、盛花2000，1~4：00，1~6：重Ventricosag, green and pElectrophoreHS gene；C:combinant pla花期的紫萼玉HVCHS 基因重组质粒；purple buddinsis detectionPCR detectioasmid.玉簪花瓣总因；C：ng, purpleof PCRon of
本文编号：2960013
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