PGC7及其互作蛋白HP1α参与细胞多能性维持及细胞周期调控

发布时间：2021-01-28 12:58

　　PGC7（Primordial germ cell 7）是一个固有无序蛋白,能够与多种蛋白产生互作关系,并参与多个生物学过程,如保护母源印记,调控早期胚胎发育,维持细胞多能性,促进体细胞重编程等。我们前期研究表明,异染色质结合蛋白HP1BP3是PGC7互作蛋白之一,二者能够通过改变染色质的浓缩状态参与印记基因GTL2的表达调控,进而影响细胞多能性。此外,PGC7能够影响HP1α与HP1BP3之间的互作关系。在这项研究的基础上,本文发现PGC7还能够与HP1α蛋白互作。HP1α是重要的异染色质结构性蛋白,通常参与异染色质高级结构建立,基因表达调控和细胞周期调控等过程。基于PGC7和HP1α的互作关系,本文分别从这两个蛋白各自的功能出发,通过实时定量PCR（Quantitative Real time PCR,qRT-PCR）、免疫印记（Western blot）、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）、CRISPR-Cas9、碱性磷酸酶染色（AP染色）、流式细胞周期检测等技术,探讨了二者在细胞多能性维持和细胞周期调控中的作用。研究结果如下:1.本文首先利用... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 PGC7及HP1α的结构及生物学功能
        1.1.1 PGC结构及功能概述
        1.1.2 HP1α结构及功能概述
    1.2 多能性维持和表观遗传调控
        1.2.1 干细胞与细胞多能性
        1.2.2 DNA甲基化及组蛋白修饰
        1.2.3 基因组印记与多能性维持
        1.2.4 H19 参与细胞多能性维持
    1.3 细胞周期的动态调控
        1.3.1 组蛋白翻译后修饰与细胞周期
        1.3.2 HP1 参与细胞周期进程
第二章 PGC7与HP1α互作关系鉴定及HP1α敲除细胞系构建
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料及仪器
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要溶液配制
        2.1.4 实验方法
    2.2 实验结果
        2.2.1 HP1α载体构建及蛋白表达
        2.2.2 HP1α与 PGC7 互作关系验证
        2.2.3 HP1α敲除细胞系构建
    2.3 讨论
    2.4 小结
第三章 PGC7与HP1α对细胞多能性的影响
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料及仪器
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要溶液配制
        3.1.4 实验方法
    3.2 实验结果
        3.2.1 HP1α敲除对细胞甲基化的影响
        3.2.2 HP1α敲除对印记基因表达的影响
        3.2.3 HP1α敲除对H19 印记调控区甲基化水平的影响
        3.2.4 HP1α与 PGC7 参与多能性因子表达调控
    3.3 讨论
    3.4 小结
第四章 PGC7与HP1α参与调控细胞周期进程
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料及仪器
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要溶液配制
        4.1.4 实验方法
    4.2 实验结果
        4.2.1 HP1α影响细胞周期进程
        4.2.2 PGC7与HP1α参与细胞增殖及细胞周期调控
        4.2.3 PGC7 影响H3K9me3和H3S10ph水平
        4.2.4 PGC7与HP1α影响细胞周期相关蛋白表达
    4.3 讨论
    4.4 小结
全文总结
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3005034