传染性支气管炎病毒S1蛋白单克隆抗体的制备及其模拟表位的筛选
发布时间：2021-03-30 22:00
传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）是家禽产业中具有高度传染性的一种病原体,易感染呼吸道,也可引起禽类肾脏和生殖道等疾病,给养禽业造成了严重的经济损失。IBV变异率高且存在多种血清型,各血清型之间几乎没有交叉保护作用,给IBV的诊断和治疗带来了巨大的挑战。S1蛋白作为主要的结构蛋白,负责病毒与宿主细胞膜的结合,能够引起机体产生中和性抗体。因此,抗IBV M41 S1蛋白单克隆抗体（monoclonal antibody,m Ab）的制备和模拟表位的筛选,为IBV的检测打下基础,并为分析S1蛋白抗原表位提供参考。本研究将IBV M41毒株接种鸡胚进行扩繁,从而获得含有病毒的尿囊液。经提取病毒总RNA,RT-PCR方法扩增选定的S1基因,构建重组载体p ET-28a-S1并导入E.coli BL21（DE3）细胞中。诱导表达产物通过SDS-PAGE分析,重组S1蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为20 k Da。复性后的重组S1蛋白经Western-blot验证可以与鸡阳性血清发生反应,表明重组S1蛋白具有反应原性。将重组S1蛋白作为免疫原免...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCR扩增S1基因
2IBVM41S1蛋白的表达、纯化及鉴定24泳显示，得到与预期大小相一致的条带，如图2.2所示，泳道2为阴性对照，3～5泳道有明显的目的条带，大小约为519bp。图2.2pMD19-T-S1重组载体的鉴定Fig.2.2TheidentificationofpMD19-T-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2：NC；3～5：pMD19-T-S1重组载体Line1：Marker(DL2000)；Line2：NC；Line3～5：recombinantvectorpMD19-T-S12.3.3表达载体pET-28a-S1的构建S1基因与pET-28a载体双酶切并纯化回收后进行连接，再转化感受态E.coliBL21（DE3）进行培养。挑取单菌落，用T7通用引物进行菌液PCR。经1%琼脂糖凝胶电泳显示目的条带位置大约在750bp，如图2.3所示，泳道2～4为不同的克隆，5泳道为阴性对照。图2.3pET-28a-S1重组载体的鉴定Fig.2.3TheidentificationofpET-28a-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2～4：pET-28a-S1重组载体；5：NCLine1：Marker(DL2000)；Line2～4：recombinantvectorpET-28a-S1；Line5：NC
2IBVM41S1蛋白的表达、纯化及鉴定24泳显示，得到与预期大小相一致的条带，如图2.2所示，泳道2为阴性对照，3～5泳道有明显的目的条带，大小约为519bp。图2.2pMD19-T-S1重组载体的鉴定Fig.2.2TheidentificationofpMD19-T-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2：NC；3～5：pMD19-T-S1重组载体Line1：Marker(DL2000)；Line2：NC；Line3～5：recombinantvectorpMD19-T-S12.3.3表达载体pET-28a-S1的构建S1基因与pET-28a载体双酶切并纯化回收后进行连接，再转化感受态E.coliBL21（DE3）进行培养。挑取单菌落，用T7通用引物进行菌液PCR。经1%琼脂糖凝胶电泳显示目的条带位置大约在750bp，如图2.3所示，泳道2～4为不同的克隆，5泳道为阴性对照。图2.3pET-28a-S1重组载体的鉴定Fig.2.3TheidentificationofpET-28a-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2～4：pET-28a-S1重组载体；5：NCLine1：Marker(DL2000)；Line2～4：recombinantvectorpET-28a-S1；Line5：NC
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的表达及ELISA诊断试剂盒的研制与应用[J]. 亓丽红,黄兵,吴家强,宋玲玲,王友令,马秀丽,于可响,刘涛,艾武,徐怀英. 浙江农业科学. 2018(05)
[2]重组大肠杆菌表达外源蛋白包涵体复性的研究进展[J]. 牟筱,宗惠,宫皓,杨焱,余四九. 甘肃畜牧兽医. 2018(04)
[3]鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用[J]. 苗立中,祖立闯,王艳,马秀丽,亓丽红,宋敏训,沈志强,韩文瑜. 中国兽医学报. 2017(03)
[4]鸡传染性支气管炎实验室诊断方法的研究进展[J]. 胡岚,陈佳静,李广兴. 黑龙江畜牧兽医. 2017(05)
[5]鸡传染性支气管炎病毒SYBR Green Ⅰ Real-time RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 苗立中,郭杨丽,祖立闯,宋敏训,沈志强,韩文瑜. 黑龙江畜牧兽医. 2017(03)
[6]鸡传染性支气管炎病毒在鸡肾上皮细胞中培养条件的优化研究[J]. 姜逸,周生,唐梦君,俞燕,程旭,沈欣悦,李建梅,高明燕. 中国家禽. 2016(10)
[7]鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白MHCⅠ分子限制性T细胞表位的鉴定[J]. 朱凤珠,鲁梅,黄庆华,杨少华,黄艳艳,吴家强,谭刘刚,张秀美,崔言顺,许传田. 畜牧兽医学报. 2016(03)
[8]蛋鸡抗IBV HI抗体效价与攻毒后产蛋性能的相关性[J]. 李新生,焦显芹,高文明,李双亮,张秀文,崔保安. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2015(01)
[9]新城疫病毒和传染性支气管炎病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 屈素洁,施开创,邹联斌,张步娴,梁媛,莫胜兰,粟艳琼,胡杰,李军. 中国预防兽医学报. 2014(11)
[10]RT-LAMP检测鸡传染性支气管炎病毒方法的建立及应用[J]. 鲜思美,杨钰,汪德生,刘嫒,尹强军,邓诗,苏刚,孔维祥. 中国兽医杂志. 2014(08)
博士论文
[1]变性蛋白复性装置研制及包涵体蛋白变性和复性技术研究[D]. 冯延叶.华东理工大学 2013
硕士论文
[1]检测传染性支气管炎病毒的夹心ELISA方法的建立[D]. 李敏.扬州大学 2019
[2]鸡传染性支气管炎病毒HH06株单克隆抗体制备及抗原捕捉ELISA方法建立[D]. 白妍.东北农业大学 2016
[3]IBV双抗体夹心ELISA检测方法的建立及免疫胶体金试纸条的研制[D]. 郑卫峰.山西农业大学 2016
[4]抗IBV山西分离株单克隆抗体的制备与鉴定[D]. 王盼.山西农业大学 2014
[5]禽传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其特性研究[D]. 王芳.中国农业科学院 2012
[6]鸡传染性支气管炎免疫胶体金诊断试纸研究[D]. 苏磊.西南大学 2008
[7]检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的HI试验与ELISA相关性比较[D]. 窦文茂.扬州大学 2008
本文编号：3110228
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCR扩增S1基因
2IBVM41S1蛋白的表达、纯化及鉴定24泳显示，得到与预期大小相一致的条带，如图2.2所示，泳道2为阴性对照，3～5泳道有明显的目的条带，大小约为519bp。图2.2pMD19-T-S1重组载体的鉴定Fig.2.2TheidentificationofpMD19-T-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2：NC；3～5：pMD19-T-S1重组载体Line1：Marker(DL2000)；Line2：NC；Line3～5：recombinantvectorpMD19-T-S12.3.3表达载体pET-28a-S1的构建S1基因与pET-28a载体双酶切并纯化回收后进行连接，再转化感受态E.coliBL21（DE3）进行培养。挑取单菌落，用T7通用引物进行菌液PCR。经1%琼脂糖凝胶电泳显示目的条带位置大约在750bp，如图2.3所示，泳道2～4为不同的克隆，5泳道为阴性对照。图2.3pET-28a-S1重组载体的鉴定Fig.2.3TheidentificationofpET-28a-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2～4：pET-28a-S1重组载体；5：NCLine1：Marker(DL2000)；Line2～4：recombinantvectorpET-28a-S1；Line5：NC
2IBVM41S1蛋白的表达、纯化及鉴定24泳显示，得到与预期大小相一致的条带，如图2.2所示，泳道2为阴性对照，3～5泳道有明显的目的条带，大小约为519bp。图2.2pMD19-T-S1重组载体的鉴定Fig.2.2TheidentificationofpMD19-T-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2：NC；3～5：pMD19-T-S1重组载体Line1：Marker(DL2000)；Line2：NC；Line3～5：recombinantvectorpMD19-T-S12.3.3表达载体pET-28a-S1的构建S1基因与pET-28a载体双酶切并纯化回收后进行连接，再转化感受态E.coliBL21（DE3）进行培养。挑取单菌落，用T7通用引物进行菌液PCR。经1%琼脂糖凝胶电泳显示目的条带位置大约在750bp，如图2.3所示，泳道2～4为不同的克隆，5泳道为阴性对照。图2.3pET-28a-S1重组载体的鉴定Fig.2.3TheidentificationofpET-28a-S1recombinantvector1：Marker(DL2000)；2～4：pET-28a-S1重组载体；5：NCLine1：Marker(DL2000)；Line2～4：recombinantvectorpET-28a-S1；Line5：NC
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的表达及ELISA诊断试剂盒的研制与应用[J]. 亓丽红,黄兵,吴家强,宋玲玲,王友令,马秀丽,于可响,刘涛,艾武,徐怀英. 浙江农业科学. 2018(05)
[2]重组大肠杆菌表达外源蛋白包涵体复性的研究进展[J]. 牟筱,宗惠,宫皓,杨焱,余四九. 甘肃畜牧兽医. 2018(04)
[3]鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用[J]. 苗立中,祖立闯,王艳,马秀丽,亓丽红,宋敏训,沈志强,韩文瑜. 中国兽医学报. 2017(03)
[4]鸡传染性支气管炎实验室诊断方法的研究进展[J]. 胡岚,陈佳静,李广兴. 黑龙江畜牧兽医. 2017(05)
[5]鸡传染性支气管炎病毒SYBR Green Ⅰ Real-time RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 苗立中,郭杨丽,祖立闯,宋敏训,沈志强,韩文瑜. 黑龙江畜牧兽医. 2017(03)
[6]鸡传染性支气管炎病毒在鸡肾上皮细胞中培养条件的优化研究[J]. 姜逸,周生,唐梦君,俞燕,程旭,沈欣悦,李建梅,高明燕. 中国家禽. 2016(10)
[7]鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白MHCⅠ分子限制性T细胞表位的鉴定[J]. 朱凤珠,鲁梅,黄庆华,杨少华,黄艳艳,吴家强,谭刘刚,张秀美,崔言顺,许传田. 畜牧兽医学报. 2016(03)
[8]蛋鸡抗IBV HI抗体效价与攻毒后产蛋性能的相关性[J]. 李新生,焦显芹,高文明,李双亮,张秀文,崔保安. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2015(01)
[9]新城疫病毒和传染性支气管炎病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 屈素洁,施开创,邹联斌,张步娴,梁媛,莫胜兰,粟艳琼,胡杰,李军. 中国预防兽医学报. 2014(11)
[10]RT-LAMP检测鸡传染性支气管炎病毒方法的建立及应用[J]. 鲜思美,杨钰,汪德生,刘嫒,尹强军,邓诗,苏刚,孔维祥. 中国兽医杂志. 2014(08)
博士论文
[1]变性蛋白复性装置研制及包涵体蛋白变性和复性技术研究[D]. 冯延叶.华东理工大学 2013
硕士论文
[1]检测传染性支气管炎病毒的夹心ELISA方法的建立[D]. 李敏.扬州大学 2019
[2]鸡传染性支气管炎病毒HH06株单克隆抗体制备及抗原捕捉ELISA方法建立[D]. 白妍.东北农业大学 2016
[3]IBV双抗体夹心ELISA检测方法的建立及免疫胶体金试纸条的研制[D]. 郑卫峰.山西农业大学 2016
[4]抗IBV山西分离株单克隆抗体的制备与鉴定[D]. 王盼.山西农业大学 2014
[5]禽传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其特性研究[D]. 王芳.中国农业科学院 2012
[6]鸡传染性支气管炎免疫胶体金诊断试纸研究[D]. 苏磊.西南大学 2008
[7]检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的HI试验与ELISA相关性比较[D]. 窦文茂.扬州大学 2008
本文编号：3110228
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